激光共聚焦检测Notch1和survivin蛋白在人肺腺癌细胞株A549中表达的相关性研究
共表达,抑制剂,荧光,资料与方法,1标本及试剂,2细胞双标免疫荧光染色,3激光共聚焦显微镜观察,4统计学方法,结果,讨论
沈圆兵 方焕(蚌埠医学院第一附属医院 安徽 蚌埠 233000)
肺癌的发病率有逐年上升的趋势,研究肺癌相关基因对于阐明肺癌发生、发展的机理以及诊断和治疗都有重要意义。Notch1信号通路的异常活化有助于肿瘤的发生发展。Survivin是迄今发现最强的凋亡抑制因子,具有肿瘤表达的特异性,乳腺癌中有研究发现survivin可能是notch1转录调控的直接靶基因[1],而在肺癌中有关Notchl和survivin表达的相关性研究国内、外鲜有报道。本研究采用免疫荧光双标法检测A549中Notchl和survivin的共表达,并用γ-分泌酶抑制剂DAPT-抑制Notch信号通路作用于A549细胞48h后激光共聚焦检测两者的荧光强度,探讨两者在非小细胞肺癌中发生发展的相关性,为进一步探明肺癌的发病机制提供理论基础和实验数据。
1.资料与方法
1.1 标本及试剂
人肺腺癌A549细胞购自中国上海生命科学院,按常规方法培养。取处于对数生长期的A549细胞,用F-12 HAMS培养基制备成1×104/ml细胞悬液,接种于放置有洁净无菌盖玻片的6孔培养板中。细胞贴壁后加入40umol/L DAPT处理,48h后取出盖玻片 ......
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