柳子川

    (广州医科大附属肿瘤医院肿瘤内二科 广东 广州 510095)

    胃癌是常见的消化道恶性肿瘤之一。胃癌的发病隐匿，初始临床症状不显著。很多患者确诊的时候已经是疾病的中、晚期，失去了治疗的最佳机会。因此，发掘可能导致胃癌发生及进展的分子标记物具有重要的意义。

    胃癌的发病原因比较多，比如有饮食习惯，环境因素，幽门螺杆菌感染及癌基因的异常激活等因素。其中，癌基因的异常激活是导致胃癌发生及进展一个很重要的原因。这些癌基因的异常激活通常可以导致胃粘膜上皮细胞发生变异，出现异常的增殖，进而出现癌变[1]。检测异常表达的癌基因可以较早期检测出胃癌的病变，对胃癌的防治具有重要的临床意义。

    1.材料及实验方法

    1.1 实验材料

    PRMI-1640培养基，胎牛血清，0.25%胰酶消化液购买自hyclone公司。MTT(3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐)，溴酚蓝，多聚甲醛购买自sigma公司。Lipofectamine? RNAiMAX购自invitrogen公司。小分子干扰RNA片段购自广州锐博公司。transwell小室购自corning公司。EVI1，cyclind1，MMP9和GAPDH内参一抗购自santa cruz公司。鼠抗人二抗购自中杉金桥公司。超敏ECL化学发光试剂盒购自碧云天公司。

    1.2 细胞培养

    胃癌细胞SGC-7901培养在含10%胎牛血清的PRMI-1640培养基之中。细胞在含5% CO2,37℃的细胞培养箱中培养。

    1.3 细胞转染

    将4×105个处于对数生长期的SGC-7901细胞均匀铺在6孔板中。24小时细胞贴壁后，将Lipofectamine? RNAiMAX和小分子干扰RNA均匀混合，在室温下面放置20分钟。之后将上述混合物加入6孔板中转染SGC-7901细胞。EVI1干扰RNA转染的细胞称为si- EVI1 ......