Maspin 在胶质瘤中表达沉默的表观遗传学机制探讨
甲基化,资料和方法,1主要材料,2细胞培养,3RT-PCR测定maspin基因转录,45-Aza-DC处理,5甲基化特异性PCR(MSP)检测maspin基因启动子甲基化,6亚硫酸氢盐测序法(BSP)对启动
刘泓渊 成刚 李宗平( 通讯作者)( 绵阳市中心医院神经外科 四川 绵阳 621000)
胶质瘤是最常见的中枢性肿瘤[1]。尽管经过积极的治疗,胶质瘤患者的预后仍较差。胶质瘤的预后与肿瘤分期、遗传和表观遗传学分子特征等生物学和临床特征相关。DNA 甲基化作为表观遗传学的一部分,被认为是人类肿瘤常见的分子学改变,通常发生在CpG 位点。在正常组织中,大量基因的CpG 位点未发生甲基化,但是在肿瘤中发生甲基化,如乳腺癌,卵巢癌,结肠癌、前列腺癌和胶质瘤。CpG 序列富集的DNA片段叫CpG 岛。CpG 岛甲基化与抑癌基因转录沉默密切相关。
乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂(maspin)在乳腺、前列腺、口腔等组织中表达,在上述癌组织中表达下调。Maspin 在正常脑组织及胶质瘤中的表达水平罕见报道。有研究表明在众多肿瘤中maspin 受表观遗传学调控,主要涉及到CpG 岛甲基化。生物信息学分析表明maspin 具有6 个CpG 岛,其中1 个位于启动子区,而maspin 在胶质瘤中表达沉默。本文旨在探索maspin 基因在胶质瘤中表达沉默与表观遗传学的关系。
1.资料和方法
1.1 主要材料
人前列腺癌细胞株PC3( 阳性对照)、胶质瘤细细胞株U343 来源于中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心。5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-A z a-DC)来源于Sigma 公司,10% 胎牛血清为Hyclone 公司产品,RNA 提取试剂购自Invitrogen 公司,逆转录试剂盒和DNA 提取试剂盒为Fermentas 公司产品 ......
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