朱俊锋 刘林 吴贻敏 黄志飞 何钊 邓昌曼 李宁 张凤(通讯作者)

    (1 蚌埠医学院第一附属医院血液科 安徽 蚌埠 230032)

    (2 蚌埠医学院临床医学系 安徽 蚌埠 230032)

    钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMK Ⅱ)为钙信号下游的多功能丝/苏氨酸蛋白酶的一种，一般由α、β、γ、δ 这四种亚单位组成，可以编码十余种同功酶[1]。研究证实，CaMK Ⅱ在机体大部分的器官组织中广泛存在，在脑、骨骼肌、肝、肾、肠道等组织以及生殖系统中同样存在明显表达，神经组织中的表达水平最为显著[2]。曾有研究发现，CaMK Ⅱ异常活化与肿瘤的发生发展呈现出明显的负相关。人内源性CaMKⅡ抑制蛋白(CaMKⅡN)的来源为树突状细胞，共包含有79 个氨基酸残基[3]。在过去，针对哺乳动物的研究证实，这一抑制蛋白能够利用与已发生自身磷酸化的CaMK Ⅱ发生特异性结合，进而对CaMK Ⅱ与其磷酸化底物相结合产酸有效阻断，发挥抑制作用[4]。本文以对上调CaMK Ⅱ抑制蛋白表达对HL-60 细胞增殖的抑制作用及机制进行研究分析为目的，展开了如下研究。

    1.资料与方法

    1.1 一般材料

    实验中所需材料包括：人急性髓系白血病(AML)细胞系HL-60(购自美国ATCC 公司)、质粒载体pcDNA3.1/myc-His(-)B(购自美国Invitrogen 公司)、脂质体 Lipofectamine2000(购自美国Invitrogen 公司)、MTT(购自美国Sigma 公司)、碘化丙锭(PI)(购自美国Sigma 公司)、BCA 蛋白检测试剂盒(购自法国PIERCE 公司)、抗人CaMK ⅡN 单克隆抗体(单抗)由本实验室合成、pcDNA3.1/CaMK ⅡN 真核表达质粒前期经本实验室合成 ......