任 杰，李 黎(通讯作者)，钟雪梅，郑爱芳，李菲菲，马 涛

    (新疆喀什地区第一人民医院呼吸与危重症医学科 新疆 喀什 844000)

    1.资料与方法

    1.1 细胞培养条件

    DMEM+10% FBS，37℃、5% CO2饱和湿度培养

    1.2 主要试剂

    双荧光素酶报告基因；PCR反应试剂盒，转染试剂盒，定点突变试剂盒，限制性内切酶DNA NotI, XhoI, Taq DNA聚合酶。

    1.3 Q-PCR引物设计

    用目标基因SNP rs1051052-C设计引物，以所需扩增基因片段DNA为模板建立PCR反应体系，纯化PCR产物；完善质粒扩增与抽提，酶切，连接和转化，将质粒及引物结果与基因库内3'UTR区域序列进行比对验证，见表1。

    1.4 双荧光素酶报告基因实验

    1.4.1 载体构建 根据PCR扩增片段比对结果，将含有SNP rs1051052-G片段的PCR扩增产物通过限制性内切酶XhoⅠ、NotⅠ进行定点位切后与质粒构建载体HmiT104523-MT06 ......