LncRNA-NBAT1通过miR-21调控PTEN增强胃癌细胞对热疗敏感性的研究
细胞株,实验方法,1表达miR-21的慢病毒制备,2稳定表达miR-21的MGC-803细胞株建立,3Westernbolt技术鉴定稳定表达miR-21的MGC-803细胞株
张国平,李建鸿,陈小龙,赵利平,康 宁,沛 雲,叶 青,赖淑贞(通讯作者)(1粤北人民医院肿瘤内科 广东 韶关 512026)
(2粤北人民医院放疗科 广东 韶关 512026)
我国胃癌新发病例和死亡病例在全球分别占比为42.6%和45.0%,因此对于胃癌的预防和治疗已迫在眉睫[1]。针对胃癌患者,除了常规的化疗手段,近几年还出现了热疗这一手段,并取得了一定的成效,但是胃癌细胞对于热疗敏感性降低,逐渐使之成为瓶颈。PTEN是现今发现的重要抑癌基因,可有效抑制胃癌细胞增殖,是胃癌的潜在治疗靶点,但其上游调控通路尚未明确。长链非编码RNA(LncRNA)是一类长度大于200 nt,并且没有蛋白编码功能的RNA[2]。研究发现lncRNA在肿瘤细胞的增殖、侵袭、迁移、物质代谢和血管形成等方面发挥重要作用[3]。LncRNA NBAT1是一个重要的“抑癌基因”,可以与微小RNA-21(miR-21)发生物理作用,然后抑制其表达,同时也可以调控miR-21靶向的下游基因抑制骨肉瘤细胞的增殖。因此,我们探索LncRNA-NBAT1通过miR-21能否调控PTEN增强胃癌细胞对热疗敏感性。
1.实验方法
1.1 表达miR-21的慢病毒制备
将2.2 μg PCMV-dr8.9dvpr520(上海钰博生物科技公司)、1.1 μg PCMV-dr8.9dvpr521、1.5 μg PCDH-EF1-MCS-miR21-T2A-His质粒(上海钰博生物科技公司)加入1 mLPBS中 ......
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