寒痹康汤对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞NF—κB表达的影响(2)
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2 mL·(100g)-1,每日分2次进行灌胃。
2.3 检测项目
2.3.1 关节肿胀指数 参照文献资料[2]采用0~4级关节评分法进行评分。0分:无关节炎;1分:小趾关节轻度肿胀;2分:小趾关节和足跖肿胀;3分:踝关节以下的足爪肿胀;4分:包括踝关节在内全部关节肿胀。关节指数积分越高,关节症状越严重。评分4分以上为造模成功。
2.3.2 标本采集 正常对照组、模型组及各实验组大鼠灌胃治疗36 d后,腹腔内注射2%戊巴比妥钠注射液进行麻醉,逐层分离膝关节各层组织,采集滑膜组织,用甲醛固定,石蜡包埋切片,切片厚度5 μm。
2.3.3 NF-κB的检测 石蜡切片常规脱蜡至水。PBS冲洗3次,每次3 min。滴加3% H2O2去离子水,37 ℃温箱孵育10 min。蒸馏水冲洗,PBS浸泡5 min。滴加试剂A,37 ℃温箱孵育15 min,倾去,勿洗。滴加1∶200的NF-κB兔抗体,4℃孵育过夜。PBS冲洗3次,每次3 min,滴加试剂B,37 ℃温箱孵育15 min。PBS冲洗3次,每次3 min,滴加试剂C,37℃温箱孵育15 min。PBS冲洗3次,每次3 min,DAB显色剂显色。自来水充分冲洗,脱水、透明、中性树胶封片。用图像分析仪进行图像分析,测定其平均灰度值。
2.4 统计学方法 采用SPSS15.0软件进行统计分析,计量资料用表示,组间差异采用方差分析及t检验,以P < 0.05 为差异有统计学意义。
3 结 果
实验结果显示,模型组大鼠关节滑膜的NF-KBp65的阳性染色强度明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P < 0.05)。经过甲氨蝶呤、寒痹康汤治疗36 d后,各治疗组的NF-κBp65的表达均下调,接近于正常水平,与正常对照组比较,差异无统计学意义(P > 0.05)。寒痹康汤组与甲氨蝶呤组比较 ......
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