参麦开肺散对降低肺纤维化小鼠胶原生成的影响(2)
 |
| 第1页 |
参见附件。
1实验材料
1.1实验动物健康SPF级C57BL/6小鼠24只，6～8周龄，体质量17～20 g，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，动物许可证号SCXK(沪)2013-0016自由饮水，室温(22±2) ℃，湿度55%～60%。
1.2实验试剂博莱霉素购自日本化药株式会社，RNAlater购自美国Ambion公司，TRIzol试剂和胃蛋白酶购自美国Sigma公司，Sircol assay试剂盒购自英国Biocolor公司，反转录试剂盒购自美国Applied Biosystems公司，实时定量PCR(RT-PCR)试剂购自日本TaKaRa公司，RT-PCR引物由上海杰瑞生物技术有限公司合成。
2方法
2.1肺纤维化小鼠模型建立采用单次气管灌注方法建立肺纤维化小鼠模型[4]，实验过程均为无菌操作。博莱霉素使用质量分数为2.5 mg·kg-1，模型组小鼠根据体质量计算出博莱霉素用量，用生理盐水补足至50 μL后进行单次气管灌注，而对照组小鼠气管灌注等量的生理盐水。造模前小鼠腹腔注射0.15 mL
质量分数2%水合氯醛溶液进行麻醉，造模后小鼠进行常规饲养。
2.2给药方法将实验用小鼠随机分为预防组和治疗组，每组12只。其中每组小鼠又分为对照组、模型组和药物组，以博莱霉素造模为第0天。预防组分为对照1组、模型1组和药物1组。药物1组在第0天开始喂食5 mg·kg-1·d-1的参麦开肺散，持续喂食21 d，而对照1组和模型1组喂食等量的生理盐水，共21 d。治疗组分为对照2组、模型
2组和药物2组。造模后第10天药物2组开始喂食相同剂量的参麦开肺散，而对照2组和模型2组喂食等量的生理盐水，持续21 d，共31 d。
2.3肺组织采集小鼠使用水合三氯乙醛麻醉致死，立即打开胸腔，取出肺组织用于后续实验。
2.4病理切片制备采用质量分数4%福尔马林液固定组织，常规取材，脱水，石蜡包埋，取4 μm
切片进行HE染色，光镜下观察不同处理下肺组织的纤维化及炎症程度。
2.5胶原含量测定取10 mg冻存的肺组织，用500 μL含1 mg胃蛋白酶且质量分数为0.5 mol·L-1的乙酸溶液将其消化，4 ℃过夜 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件。