类风湿关节炎患者外周血miR—146a及miR—155的表达及临床意义(2)
1.2 试剂与仪器 人外周血淋巴细胞分离液(天津灏洋公司)；miRcute miRNA Isolation Kit及miRcute miRNA First-Strand cDNA Synthesis Kit(TIANGEN公司)；SYBR Premix Ex Taq(Tli RNaseH Plus)(TaKaRa公司)；miR-146a、miR-
155、U6引物(TIANGEN公司)；实时荧光定量PCR仪(LC480，瑞士)。
1.3 外周血淋巴细胞(PBMCs)提取 抽取RA患者及正常人外周血2 mL，取2 mL PBS液与血液1∶1混匀后，沿管壁小心加于4 mL淋巴细胞分离液面上，置于1500 r·min-1离心机离心20 min。
此时可见试管中不同组分的条带，从上至下分别为血浆层，淋巴细胞层(乳白色)，分离液层和红细胞层。用移液器轻轻吸取淋巴细胞层，置于1.5 mL
无RNA酶的离心管中，加适量的PBS稀释，置于2000 r·min-1离心机离心10 min洗涤 ......
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155、U6引物(TIANGEN公司)；实时荧光定量PCR仪(LC480，瑞士)。
1.3 外周血淋巴细胞(PBMCs)提取 抽取RA患者及正常人外周血2 mL，取2 mL PBS液与血液1∶1混匀后，沿管壁小心加于4 mL淋巴细胞分离液面上，置于1500 r·min-1离心机离心20 min。
此时可见试管中不同组分的条带，从上至下分别为血浆层，淋巴细胞层(乳白色)，分离液层和红细胞层。用移液器轻轻吸取淋巴细胞层，置于1.5 mL
无RNA酶的离心管中，加适量的PBS稀释，置于2000 r·min-1离心机离心10 min洗涤 ......
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