巴戟天—牛膝醇提物对SD大鼠软骨细胞G1/S周期蛋白与基因表达影响的实验研究(2)
2.2 软骨细胞的分离、培养与鉴定 在麻醉状态下进行脱颈椎处死SD大鼠，每次3只，分离膝关节处关节软骨。收集并剪碎至1 mm3/单位体积，PBS缓冲液冲洗至少3次后移至无菌小培养皿中，按每个器皿2.5 mL的体积加入质量分数为0.2%的Ⅱ型胶原酶进行消化，15 mL离心管收集消化后的上清液(每次2 h)，1500 r·min-1离心机离心后弃上清液，移液器代液(含质量分数为10%胎牛血清DMEM)状态缓慢吹匀沉淀。经计数板计数(2×105·mL-1)后种植原代软骨细胞于培养瓶进行培养，48 h后初次换液。镜下观察细胞铺满80%瓶底面积时，经胰酶消化进行细胞传代。本实验使用第2代软骨细胞[5]。
Ⅱ型胶原免疫组织化学染色：软骨细胞(经计数每毫升2500个)待爬片后，经PBS冲洗3次，质量分数为4%的多聚甲醛固定30 min。再经冲洗、裂解(质量分数为0.1%的破膜剂50 μL)20 min，冲洗后加入50 μL质量分数为3%的H2O2反应
20 min。再次冲洗后经5% BSA封闭30 min ......
您现在查看是摘要页，全文长 4170 字符。
Ⅱ型胶原免疫组织化学染色：软骨细胞(经计数每毫升2500个)待爬片后，经PBS冲洗3次，质量分数为4%的多聚甲醛固定30 min。再经冲洗、裂解(质量分数为0.1%的破膜剂50 μL)20 min，冲洗后加入50 μL质量分数为3%的H2O2反应
20 min。再次冲洗后经5% BSA封闭30 min ......
您现在查看是摘要页，全文长 4170 字符。