2.4 Western blot法检测关节软骨CKIε、CollagenⅡ、PGS1蛋白表达 取软骨组织置于干净的研钵中，加入液氮并研磨成细粉，按1 g∶4 mL加入RIPA蛋白裂解液进行冰上裂解，每30分钟震荡1次，2 h后吸取裂解液，离心机以14 000 r·min-1离心30 min，吸取200 μL上清液于EP管中，加入50 μL蛋白上样缓冲液，100 ℃加热变性5 min。根据BCA蛋白定量结果加样，体积分数为10%的SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳2.5 h，转膜，封闭，分别孵育CKI-ε、CollagenⅡ、PGS1一抗，4 ℃过夜，TBST洗3次，每次10 min，室温孵育二抗1 h，TBST洗3次，曝光显影。采用凝胶图形分析软件Image Lab对显影后的蛋白条带灰度值进行分析。

    2.5 Masssion染色法观察关节软骨 常规脱蜡经蒸馏水洗，切片经苏木精核染5～10 min，蒸馏水冲洗1 min，体积分数为1%的盐酸乙醇分化，浸入温水返蓝数分钟;然后将切片用丽春红酸性品红液处理7 min，并浸入质量分数为2%的冰醋酸中5 s;用质量分数为1%的磷钼酸分化10 min ......