涂海水 邱志伟 金灵璐 郑志煌 李莹莹 陈毅涛 李超 付长龙

    【摘 要】目的：探讨乌头汤调控lncRNA GAS5进而干预白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的软骨细胞炎症反应的效果及机制，为乌头汤的临床应用提供实验依据。方法：4周龄SPF级SD雄性大鼠10只，提取大鼠双膝关节软骨，进行体外软骨细胞的分离与培养，采用Ⅱ型胶原免疫组化法对软骨细胞进行鉴定；经10 ng·mL^-1IL-1β干预24 h诱导软骨细胞退变。将软骨细胞随机分为空白对照组、模型对照组(10 ng·mL^-1IL-1β)和乌头汤组(150 μg·mL^-1乌头汤水提物)。通过Real-time PCR检测各组软骨细胞中lncRNA GAS5的相对表达水平。免疫荧光染色技术检测软骨细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)和解聚蛋白样金属蛋白酶-5(ADAMTS-5)的荧光表达量。結果：与空白对照组比较，模型对照组lncRNA GAS5相对表达水平显著升高(P -1氧气中吸入麻醉，并维持在2%异氟醚中。将大鼠双膝及周围部位以体积分数为75%的乙醇消毒，然后用眼科小剪从大鼠踝关节处剪开皮肤，往大腿方向延伸，暴露出下肢肌肉。剔除肌肉后用咬骨钳分离出双膝关节，用质量分数为0.9%的生理盐水洗去关节部位的肌肉、毛发。将膝盖浸泡在体积分数为75%的乙醇下带入提前紫外线消毒过后的超净台内操作。剃取透明软骨置于无菌培养皿内，将其切碎至1 mm3大小。加入质量分数为0.2%的Ⅱ型胶原酶消化，待消化完全后转移至无菌离心管中，以1000 r·min^-1离心5 min，离心半径12.29 cm；去除上层上清液，往下层沉淀组织中加入含有质量分数为10% FBS的DMEM终止消化，并将其转移到培养瓶中培养 ......