刘小芹，罗育，曾麒燕(广西医科大学基础医学院，广西 南宁 530021)

    白桂木凝集素基因的5’RACE与3’RACE扩增及序列分析

    刘小芹，罗育，曾麒燕

    (广西医科大学基础医学院，广西 南宁530021)

    摘要：[目的]对白桂木凝集素基因进行扩增及序列分析。[方法]采用RT-PCR结合RACE技术，扩增得到白桂木凝集素(AHL)基因的保守区域、5’末端及3’末端。用Vector NTI软件将测序得到的AHL cDNA的保守区域、5’末端、3’末端进行校正、拼接得到完整AHL cDNA序列。[结果]全长含有933个核苷酸。其推导的氨基酸序列NCBI做BLAST比对，相似度高达70%～80%。[结论]对白桂木凝集素基因的cDNA序列进行研究，可为进一步从分子水平探明白桂木凝集素的作用机制提供科学依据。

    关键词：白桂木凝集素；RACE技术；基因克隆；序列分析

    白桂木(Artocarpus hypargyreus Hance)系桑科波罗蜜属常绿乔木，是一种经济价值很高的树种，主要分布于桂东南地区。其根可入药，味甘、淡，性温，具有祛风利湿、活血通络等功效[1]，在民间应用较广泛。白桂木种子富含白桂木凝集素(Artocarpus hypargyreus Hance lectin，AHL)，其药用价值已经引起医药学界的注意。本课题组前期研究发现，AHL能够促进小鼠骨髓来源树突状细胞(BmDC)的分化成熟，能够抑制人急性白血病T淋巴细胞(Jurkat T)及小鼠T淋巴瘤细胞(EL-4)的增殖[2]；并对白桂木基因组DNA的提取方法进行了研究[3]。本实验首次报道AHL基因的cDNA序列，为今后进一步从分子水平探明AHL的作用机制及其在临床疾病防治等方面的开发应用奠定良好的理论基础。

    1 实验方法

    1.1材料新鲜的白桂木叶子于2013年7月采自广西药用植物园，选取其中嫩、大、薄的叶片经液氮速冻后保存于-80℃冰箱备用。Easypure Plant RNA Kit(北京全式金)，RT-PCR反转录试剂盒(Fermentas)，Taq DNA聚合酶，聚乙烯吡 咯 烷 酮 (Polyvinylpyrrolidone，PVP)，pMD-18T载 体(Takara)，SMARTTMRACE cDNA Amplification kit(BD Bioscience Clontech Company)，DNA回收试剂盒(北京全式金)，引物合成和测序分别由深圳华大基因科技有限公司和上海生工生物工程技术服务有限公司完成 ......