李海波,谷建军,英锡相,关洪全

    (1.辽宁中医药大学基础医学院,辽宁沈阳110032;2.辽宁中医药大学药学院,辽宁大连116600)

    厚朴酚(Magnolol)是中药厚朴的主要有效成分之一,是从厚朴中分离出的具烯丙基取代的联苯酚类化合物。近年来,研究发现厚朴酚具有抗炎、抗菌、肌肉松弛、抗肿瘤和抗氧化的作用[1-2]。但有关其抗肿瘤的作用机制缺乏探讨。以人非小细胞性肺癌HepG-2细胞为材料,应用MTT法及荧光显微镜等方法,研究不同浓度的厚朴酚诱导肿瘤细胞死亡的机制,报道如下。

    1 材料

    1.1 药品与试剂 胎牛血清购自大连生物试剂公司。谷氨酰胺、胰蛋白酶、青霉素、链霉素、HEPES、MTT、三氯乙酸(TCA)、3-甲基腺嘌呤(3-MA)、MDC、RPMI-1640培养液购自Gibco(Grand Island,NY,USA);厚朴酚购自北京生物制品研究所,用二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)溶解(终浓度≤0.01%);经HPLC检测纯度均大于98%。用RPMI-1640培养液稀释至所需浓度,并经0.22 μ m微孔滤器过滤除菌。荧光显微镜(Olympus,BX-51)。

    1.2 细胞株 人非小细胞性肺癌HepG-2细胞(购自American Type Culture Collection)。将处于对数生长期的HepG-2细胞接种在含10%胎牛血清和2 mmol/L谷氨酰胺的RPMI-1640培养液中,在饱和湿度,温度为37℃,浓度为5%CO2的培养箱中培养。

    2 方法

    2.1 细胞生长抑制实验 取处于对数生长期的HepG-2细胞,以每孔100 μ L接种于96孔板。24 h后分别加入厚朴酚(浓度 0,5,10,20,40,60,80,160 μ mol/L),加药作用 6,12,24,48 h 后 ,每孔加入25 μ LMTT(5 g/L),继续培养4 h 后,弃上清,每孔加入150 μ L DMSO溶解,酶标仪492 nm检测,绘制时效及量效曲线。

    抑制率(%)=[A492(空白组)-A492(厚朴酚)]/A492(空白组)×100%

    2.2 TUNEL法检测4种细胞的凋亡率 取HepG-2细胞不同浓度的厚朴酚处理组和阳性药物处理组,消化离心,制成细胞涂片 ......