王 莹,李文媛,李明秋,丁 利,管业秋,赵斯达

    (牡丹江医学院解剖教研室,黑龙江牡丹江157011)

    脑缺血后恢复脑血流是治疗脑缺血最关键的方法,但再灌注后可加重缺血脑组织的损伤,这种损伤以凋亡为主,因此减少缺血/再灌注后神经元凋亡为重要的脑保护机制。细胞凋亡线粒体通路中重要酶Caspase-9和Caspase-3在线粒体介导的细胞凋亡中起着重要的作用[1]。通过干预线粒体通路,可阻断细胞凋亡的进程。Livin作为一种新发现的凋亡抑制蛋白(IAP)能够干预线粒体通路,发挥抑制细胞凋亡的作用[2]。但对于Livin、Caspase-9和Caspase-3在脑缺血再灌注损伤中的作用研究较少。黄芪皂甙Ⅳ是一种纯化小分子皂甙(分子量784),作为黄芪的主要活性成分,已被广泛的应用于缺血性脑血管病的治疗[3],能够促进脑缺血损伤的神经功能恢复。但关于黄芪皂甙Ⅳ在脑缺血中抑制细胞凋亡的机制研究尚不明确。本研究通过建立大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)模型,观察黄芪皂甙Ⅳ对大鼠海马区神经细胞凋亡及Livin、caspase-9、caspase-3表达的影响,探讨黄芪皂甙Ⅳ抑制细胞凋亡的作用机制,为黄芪皂甙Ⅳ临床治疗脑缺血再灌注损伤提供新的实验依据和理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 动物 雄性SD大鼠42只,清洁级,体质量280～320 g,购于中国医科大学实验动物中心(许可证号:SYXK[辽]2003-0013)。

    1.2 试剂与药物 黄芪皂甙Ⅳ(西安赛邦医药),纯度98%。用时以生理盐水配成质量浓度1.0 mg/mL。尼莫地平注射液(河北医科大学制药厂),20 mg/100 mL,用时以生理盐水配成质量浓度为0.1 mg/mL。Livin、Caspase-9和Caspase-3多克隆抗体、免疫组化SP试剂盒、TUNEL试剂盒购于北京中山生物试剂公司;TRI-zol试剂、SuperscriptII反转录酶、dNTPs购自Invitrogen公司;TaqDNA聚合酶、DL 2000 DNA标志物购自Takara公司;Livin、Caspase-9、Caspase-3和β-actin引物由大连宝生物合成。

    1.3 动物模型制备与分组 大鼠按体质量分层,随机分为4组:假手术组(n=6)、模型组(n=12)、尼莫地平对照组(n=12)、黄芪皂甙Ⅳ组(n=12)。参照宫健伟等[5]的线栓改良法复制大鼠左侧大脑MCAO脑缺血模型。各组于缺血前5 min第1次给药,腹腔注射,缺血后12、24、48 h给药3次,共给药4次 ......