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    (江苏省中医院 检验科，南京 210029)

    川芎嗪降低咖啡因诱导的PC12细胞凋亡的研究

    王佳，高峰，张春兵*

    (江苏省中医院 检验科，南京 210029)

    目的 分析川芎嗪预处理大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤克隆化细胞株PC12细胞后咖啡因诱导的细胞凋亡情况，探讨川芎嗪治疗脑缺血再灌注损伤的机制。方法 采用川芎嗪预处理PC12细胞后，制备咖啡因细胞损伤模型,通过CCK-8法活细胞检测、Hoechst-33342染色、流式细胞术、RT-PCR分析细胞凋亡发生机制。结果 川芎嗪预处理后，PC12细胞的存活数提高，细胞未见大量凋亡小体形成、总体凋亡率降低，caspase3、caspase-8、caspase9活性降低，线粒体膜电位提高，Bax/Bcl-2比值降低。结论 川芎嗪预处理后能降低咖啡因诱导的PC12细胞凋亡。

    川芎嗪；PC12细胞；脑缺血性损伤；凋亡

    脑缺血/再灌注损伤是多种机制参与的一种复杂的病理生理过程，多种环节因素之间又互相作用。抑制脑缺血再灌注是目前有效治疗脑卒中的关键。川芎嗪(tetramethylpyrazine，TMPz)能减轻脑缺血再灌注性脑损伤程度，具有显著的缺血后脑保护作用[1]，前期研究以及其他实验报道，川芎嗪可以穿透血脑屏障，降低缺血再灌注损伤区神经元的凋亡。PC12细胞表达神经生长因子(NGF)受体，NGF可诱导产生神经表型，广泛用于神经系统疾病的体外研究。钙超载是导致神经细胞死亡的“最后共同通路”[2]。细胞内游离钙的增加通常是细胞外钙的内流或细胞内钙库释放所致。咖啡因是兴奋中枢神经系统最常用的一种黄嘌呤制剂，作为细胞肌浆网理阿诺碱受体(ryanodine receptor)的激动剂，能引发对ryanodine敏感的钙库释放[3]。因此，咖啡因常被用于制备神经元钙离子超载模型[4]。本研究目的在于通过制备咖啡因PC12细胞损伤模型,探讨川芎嗪脑缺血再灌注损伤保护作用与细胞凋亡的关系。

    1 材料

    1.1 药品与试剂 川芎嗪：中国药品生物制品检定所(中国)；胎牛血清、马血清、DMEM培养基：Gibco(新西兰)；咖啡因：Sigma(美国)；明胶：Sigma(美国)；CCK-8试剂盒：Dojindo(日本)；Active Caspase-3 Staining Kit，Active Caspase-8 Staining Kit和Active Caspase-9 Staining Kit：Biovision(美国)；罗丹明：Invitrogen(美国)；RT-PCR试剂：宝生物(日本) ......