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    (成都中医药大学，成都 610075)

    炙甘草汤对脐静脉内皮细胞分泌转化生长因子与G-CSF的影响

    马鹏，张泽渊，刘渊*

    (成都中医药大学，成都 610075)

    目的 研究炙甘草汤对转化生长因子(TGF-β1)与G-CSF分泌的影响。方法 选取炙甘草汤与右归饮2个方剂,脐静脉内皮细胞设空白对照组、炙甘草汤组、右归饮组及混合组，每组分别加入相应中药液，于培养第3，6，9天收集细胞培养上清液，ELISA检测上清液中TGF-β1与G-CSF的分泌水平。结果 TGF-β1分泌水平：给药组均明显刺激脐静脉内皮细胞产生TGF-β1，与空白对照组相比差异有统计学意义(P1 材料与方法

    1.1 细胞株 脐静脉内皮细胞株EA.hy926购于中科院上海细胞库。

    1.2 药物与试剂 炙甘草汤：炙甘草、桂枝、人参、生地黄、麦门冬、麻仁、大枣、生姜、阿胶；右归饮：熟地黄、山药、山茱萸、枸杞子、甘草、杜仲、肉桂、制附子，所有中药均购自北京同仁堂。中药煎煮后进行过滤除渣、高温灭菌，每1 mL药液含生药0.2 g。

    DMEM培养基(GIBCO),FBS(GIBCO),谷氨酰胺(GIBCO)，六孔培养板(Corning),0.25% Trypsin-EDTA(GIBCO)，TGF-β1 ELISA试剂盒(达科为)，G-CSF ELISA试剂盒(CUSABIO)。

    1.3 实验分组 细胞分为空白对照组(只加基本培养基，不加中药液)、右归饮组、炙甘草汤组及混合组(添加炙甘草汤与右归饮)，每组样本数为10。培养第3,6,9天收取细胞培养上清液，1 000 r/min，离心15 min，后分装-20 ℃保存。

    1.4 ELISA检测 1)TGF-β1检测：实验前将各试剂放至室温平衡30 min，将样品置于80 ℃水浴8 min进行活化，取出后冷却5 min，计算样品孔及标准品孔数，100 μL/孔在相应孔中加入待测样品及标准品，摇匀，封膜后于室温孵育2 h,吸弃孔内液体 ......