吴振起，王思源，平 静，于 艳，南春红

    (1.辽宁中医药大学附属医院儿科，沈阳110032；2.辽宁中医药大学附属医院中药实验室，沈阳110032)

    竞争性ELISA、HPLC测定清燥救肺汤中甘草酸的含量

    吴振起1，王思源1，平 静1，于 艳2，南春红1

    (1.辽宁中医药大学附属医院儿科，沈阳110032；2.辽宁中医药大学附属医院中药实验室，沈阳110032)

    目的 建立清燥救肺汤中甘草酸(GA)快速灵敏的免疫分析检测方法。方法 以制备出的甘草酸特异性单克隆抗体为基础，选择单抗最佳工作浓度，建立GA间接竞争酶联免疫分析方法(ELISA)，并应用此方法检测清燥救肺汤中的GA含量。同时结合高效液相色谱法(HPLC)进行比较确证。结果 ELISA测定清燥救肺汤中成分GA在0.312 5～10 μg/mL(r＝0.996 9)范围内线性关系良好，平均回收率不低于92.5%；3批样品中GA含量均值为10.125 mg/g，与HPLC测定结果相近，RSD<1%。结论 ELISA对中药成分测定准确可靠，重复性好，是HPLC测定有益的技术补充。

    清燥救肺汤；甘草酸；ELISA；HPLC；含量测定

    清燥救肺汤是治疗燥热伤肺的经典名方，首见于《医门法律》，为清代医家喻嘉言创制，由桑叶、石膏、甘草等中药组成。清燥救肺汤在临床上广泛应用，然而目前尚缺乏质量控制的方法。现代研究[1-2]表明，甘草酸(GA)具有抗肿瘤、抗炎、抗病毒、增强免疫功能等作用，是清燥救肺汤中主要的活性成分之一，可作为其质量控制、作用机制等研究的对象。目前，对于甘草酸的含量测定主要采用HPLC[3-4]、毛细管电泳法[5]、液相色谱-串联质谱法[6]等，尤以HPLC最为常用。中药复方活性成分复杂，应用高效液相色谱法测定活性成分存在前处理繁琐、耗时等困难。随着酶联免疫分析法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA)的发展，应用ELISA可快速处理样品、灵敏度高、对大量样品可同时检测[7]，在科学研究、生物制品生产中开始被应用[8]。因此本实验拟建立快速检测甘草酸的ELISA方法，并进行HPLC、ELISA同时测定清燥救肺汤中甘草酸含量的比较研究，进一步对免疫分析技术在活性成分测定的可行和可信性进行确证。

    1 材料

    清燥救肺汤中各饮片，购自辽宁中医药大学附属医院；甘草酸对照品(批号110731-200614)，由中国药品生物制品检定所提供；抗GA单克隆抗体(GAMAb)、GA-人工抗原(GA-HSA) ......