黄 灿，冼绍祥，马春涛

    (1.三亚市中医院，海南 三亚 572000；2.广州中医药大学第一附属医院，广州 510405)

    黄芪甲苷预处理对无血清及缺氧诱导的骨髓间充质干细胞TNF-α、TGF-β1基因表达的影响

    黄灿1，冼绍祥2*，马春涛1

    (1.三亚市中医院，海南 三亚 572000；2.广州中医药大学第一附属医院，广州 510405)

    摘要：目的观察黄芪甲苷预处理对无血清及缺氧诱导的骨髓间充质干细胞(MSCs)凋亡相关因子的影响，并探讨其作用机制。方法采用密度梯度离心法分离培养大鼠MSCs，通过药物细胞毒性试验检测黄芪甲苷对MSCs细胞活性的影响，分别以40、80、160 μg/mL的黄芪甲苷预处理MSCs 24 h，后进行无血清及缺氧培养24 h，RT-PCR法检测细胞中TNF-α、TGF-β1的基因表达情况。结果密度梯度离心法可有效分离大鼠MSCs；各浓度黄芪甲苷对MSCs细胞活力均无影响；无血清及缺氧诱导可下调TGF-β1的基因表达；160 μg/mL黄芪甲苷组可上调TGF-β1的基因表达。结论无血清及缺氧诱导的MSCs凋亡可能是由于缺氧及生长因子匮乏的刺激所引起的，黄芪甲苷抑制无血清及缺氧诱导的MSCs凋亡的作用可能是通过提高MSCs在缺血缺氧环境下合成生长因子的能力实现的。

    关键词：骨髓间充质干细胞；细胞凋亡；黄芪甲苷；生长因子

    研究[1]表明，运用干细胞移植替代心肌梗死后缺血凋亡的心肌细胞，促进梗死区域心肌细胞再生及局部毛细血管网及侧支循环的形成，可使心功能得到一定程度的改善，从而被美国心脏病学会评为世界心血管领域10大研究进展之一。而MSCs在心肌梗死后的缺血和营养剥夺的病理微环境中生存率较低，大大限制了MSCs对损伤心肌的修复能力[2]。本研究早前已经证实了黄芪甲苷预处理对于无血清及缺氧诱导的MSCs凋亡具有抑制作用[3]，但不清楚其作用机制，因此继续通过对凋亡相关因子的检测，来探讨黄芪甲苷抑制MSCs凋亡的作用机制。

    1材料与方法

    1.1 动物SPF级SD大鼠5只,体质量120～150 g,雄性，由广州中医药大学实验动物中心提供。动物合格证号：0099253。

    1.2试剂DMEM/F12培养基、胎牛血清、双抗、0.25%胰酶及胰酶替代物，GIBCO公司；黄芪甲苷，购自中国药品生物制品检定所，批号：110781-200613；Percoll分离液购自GE公司；厌氧产气袋、氧气指示剂及密封培养罐购自日本三菱瓦斯化学株式会社；CCK-8试剂盒购自日本同仁化学研究所；Trizol购自美国invitrogen公司；cDNA第一链合成试剂盒、UltraSYBR Mixture(With ROX)购自北京康为世纪科技有限公司；其他试剂 ......