李晓辉，王亚君，张国利，张剑白

    (哈尔滨医科大学附属第一医院儿科，哈尔滨 150001)

    芪苈强心胶囊改善柔红霉素心脏毒性的体外实验

    李晓辉，王亚君，张国利，张剑白

    (哈尔滨医科大学附属第一医院儿科，哈尔滨 150001)

    目的 探讨芪苈强心对柔红霉素心脏毒性的预防和治疗作用研究。方法 收集32只体外分离培养乳鼠心肌细胞，显微镜下观察心肌细胞形态学变化，凋亡试剂盒检测心肌细胞凋亡率；TUNEL法检测细胞凋亡率，采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测乳酸脱氢酶(LDH)、α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)等蛋白的表达；采用电化学发光免疫分析法测定血清脑钠肽(BNP)。结果 芪苈强心的体外实验中4组研究对象的心肌细胞凋亡率存在明显差异(P1 材料与方法

    1.1 材料 选取雄性大鼠80只，体质量(201.2±18.9) g，购于第三军医大学实验动物中心。DMEM培养液(广州市左克生物技术有限公司提供)；胎牛血清(赛业生物科技集团提供)；Ⅱ型胶原酶(上海玉博生物科技有限公司提供)；胰蛋白及酶基质胶与Mdivi-1(美国Sigma公司)；LDH、HBDH、CK、CK-MB、SOD、MDA、BNP试剂盒(上海玉博生物科技有限公司提供)；芪苈强心、柔红霉素购于杭州海瑞化工有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 心肌细胞的分离培养 取1～3 d SD大鼠，消毒皮肤，取出心脏，PBS液清洁2次后剪成1 mm3大小的组织块，加胰酶反复消化5次，加入含5%胎牛血清的DMEM培养基中，制成细胞悬液，按细胞常规培养方法，心肌细胞在含20%胎牛血清的DMEM培养液中于37 ℃、体积分数5% CO2的饱和湿度条件下培养[4]。

    1.2.2 芪苈强心的体外实验 取处于对数生长期的心肌细胞分别加入4个培养瓶中，每瓶各10 mL,调整细胞浓度为2×105/mL，实验分4组：空白对照组、DNR组、芪苈强心干预组(DNR+芪苈强心) ......