魏晓露，李月红，李国霞

    (1.天津中医药大学研究生院，天津 301617；2.天津南开医院肾内科，天津 300100 ；3.天津医科大学国际医学院，天津 300070 )

    肾纤维化(renal fi brosis，RF)是慢性肾脏疾病发展至终末期肾功能衰竭的重要病理基础，严重危害人类健康，有效干预纤维化的发生、发展，已受到医学领域的广泛关注[1-2]。蚓激酶是中药地龙中具有蛋白水解作用的单体成分，有激活抗凝，抑制血小板聚集，改善微循环等作用，临床上主要用于防治心脑血管病、下肢深部静脉血栓、肾病综合征等。我们前期研究发现蚓激酶可有效阻抑UUO大鼠肾纤维化的进展[3]。基于前期研究，本实验从体外细胞角度，探讨蚓激酶对转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激的人肾小管上皮细胞(HK-2)细胞胶原蛋白Ⅰ(ColⅠ)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)、NADPH氧化酶4(NOX4)表达的影响。

    1 材料

    1.1 实验材料及试剂 人肾小管上皮细胞(HK-2)，由天津中医药大学第一附属医院研究所惠赠；蚓激酶购自北京普天同创公司(规格：26000 U/支)；盐酸贝那普利购自北京诺华制药有限公司；MTT购自Amresco公司；TGF-β1、DMSO、RIPA裂解液均购自Sigma公司；一抗 ColⅠ、PAI-1、NOX4、GAPDH兔抗大鼠单克隆抗体，二抗山羊抗兔 IgG均购自proteintech公司；TRIpure试剂购自艾德莱公司；cDNA合成试剂盒、实时定量PCR扩增预混合溶液均购自novoprotein公司。

    1.2 主要仪器 细胞培养箱(Thermo)；倒置显微镜CKX41(Olympus)；酶标仪(Thermo Varioskan)；电泳仪、转膜装置(美国 Bio-Rad)；荧光PCR仪器ABI7500(美国ABI)。

    2 方法

    2.1 细胞培养 将冻存的HK-2复苏后，加入含10%胎牛血清的DMEM/F12(加入100 U/L链霉素和100 U/L青霉素)培养液在37 ℃、5%CO2的培养箱中培养 ......