苟 英，吴东叶，黄启林，王明义*

    (1.西部战区总医院妇产科，成都 610083；2.西部战区总医院普外科，成都 610083)

    重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis，SAP)是一种以胰腺局部炎性损伤和全身炎症反应为特征的疾病，其病情重、并发症多、病死率高[1]。SAP发病早期常伴有肠屏障功能障碍，导致肠道内细菌和有毒物质进入血循环引起肠源性感染，加重患者病情。间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)因具有显著的抗炎与免疫调节能力，已被广泛应用于炎症性疾病的治疗与研究。本研究主要探讨外源性P-MSCs移植能否改善SAP大鼠肠屏障功能。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物及主要试剂

    健康成年雄性SPF级SD大鼠，体质量200～220 g，购自成都达硕实验动物有限公司。间充质干细胞无血清培养基购自友康恒业生物科技(北京)有限公司。牛磺胆酸钠购自美国Sigma公司。CMDil细胞染料购自美国赛默飞公司。KGF、D-乳酸、内毒素、IL-1β、TNF-α与CRP检测试剂盒均购自上海江莱生物科技有限公司。CCK-8试剂盒购自东仁化学科技(上海)有限公司。兔抗大鼠ZO-1与Occludin抗体购自英国Abcam公司。

    1.2 胎盘间充质干细胞培养

    胎盘间充质干细胞来自我院普外科汤礼军教授课题组馈赠，采用间充质干细胞无血清培养基培养，具体培养方法详见HUANG等[2]研究。

    1.3 模型制备及分组

    24只SD大鼠，术前禁食12 h，自由饮水，采用随机数字表法分为SHAM组、SAP组与SAP+P-MSCs组，各8只。SHAM组：大鼠经异氟烷吸入麻醉后，开腹翻动胰腺数次然后关闭腹腔，术后6 h经尾静脉注射1 mL PBS缓冲液。SAP组：大鼠麻醉后开腹，经胰胆管采用微量输液泵输注4%牛磺胆酸钠(0.1 mL·100 g-1)，术后6 h经尾静脉注射1mL PBS缓冲液。SAP+P-MSCs组：SAP建模术后6 h，经尾静脉注射P-MSCs(1×106个·100 g-1)。所有大鼠术后禁食不禁水，于P-MSCs输注24 h后麻醉开腹，经腹主动脉采血，然后离心(3 500 rpm，5 min)，收集血清保存于-80℃备用。无菌条件下采集大鼠胰腺与肠系膜淋巴结组织，置于4℃ 1×PBS缓冲液中用于后续细菌培养。剪取末端回肠组织 ......