胡英华，贾炳超，尚 鑫，于立清，孙 波*

    (1.长春中医药大学，长春 130117；2.长春健康职业学院，长春 130012)

    朱砂的毒性主要源于包括汞在内的某些成分在肾脏的蓄积而引起的肾脏功能减退，乃至衰竭[1-2]。由于这种蓄积随着年龄的增长而增加，所以，朱砂肾毒性机理的研究对于老年人尤为重要。由于细胞凋亡的进程受到多种细胞信号通路的调控[3]，但前期研究结果排除了朱砂肾毒性对JNK通路、Caspase-9介导的线粒体信号通路等的影响，同时考虑到重金属汞离子可以与谷胱甘肽的巯基结合而影响谷胱甘肽在血液中或脏器中的水平，因此本实验将朱砂的肾毒性锁定在与谷胱甘肽水平相关的氧化应激通路[4-5]。

    前期的MTT实验与HE实验研究结果已经证明，朱砂以及Hg2+和HgS，经连续给药后均会在不同程度上导致肾脏的病变，并且病变程度与剂量呈同向变化规律，所以，本研究以SD大鼠为研究对象，将这些物质对血液与肾脏中的谷胱甘肽及谷胱甘肽过氧化物酶的影响作为指标，进一步研究朱砂的肾毒性机理。

    研究表明，针灸某些穴位可以提高肝脏组织中的谷胱甘肽水平及谷胱甘肽过氧化物酶的活性[6-8]，考虑到肾脏与肝脏之间存在精与血之间相互滋生和相互转化的关系，本实验设置了针灸对照组，以此来研究针灸对氧化应激的缓解作用。

    1 实验材料

    1.1 实验设备

    Sigma台式高速冷冻离心机；组织匀浆机江苏金坛江南仪器厂；Mettler Toledo AL204电子分析天平(万分之一)Agilent 1260高效液相色谱仪美国安捷伦通用仪器有限责任公司；电子分析天平(十万分之一)梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司；TD4台式低速离心机；南凯达科学仪器有限公司(4 000 r/min)；ODS高效液相色谱柱大连依利特分析仪器有限公司；Sigma台式高速冷冻离心机德国Sigma公司3K15；FA1004B型电子天平上海佑科仪器仪表有限公司；19686酶标仪美国BIO-RAD伯乐公司。

    1.2 实验药剂

    水飞朱砂(批号：20141213)安国市药材天然粉贸易有限公司；硫化汞(分析纯)(批号：20160503)北京化工厂；柠檬酸钠(分析纯)(批号：20160708)北京化工厂；乙腈(色谱纯)(批号：20160205)Fisher实验器材有限公司；氢氧化钠(分析纯)(批号：20150107)北京化工厂；高氯酸(分析纯)(批号：20161126)天津市鑫源化工有限公司；甲醇(色谱纯)(批号：20151117143)山东禹王实业有限公司化工分公司；磷酸氢二钾(分析纯)(批号：201504021)西陇化工股份有限公司；氯化钠(分析纯)(批号：20160105)北京化工厂；EDTA(分析纯)(批号：20160105)天津天泰精细化学品有限公司；硝酸(优级纯)(批号：20150508) 北京化工厂；DTNB标准品(批号：D218200)SIGMA-ALDRICH公司；谷胱甘肽标准品(批号：G4251)SIGMA-ALDRICH公司；GSH-P测试盒(批号：20180116)；南京建成生物工程研究所 ......