胡耀文，李 鑫*，武利伟，解 靖，刘振杰，赵新岗

    (1.河北省保定市第一中心医院神经外一科，河北 保定 071000；2.首都医科大学三博脑科医院神经外科，北京 100000)

    神经胶质瘤是临床常见的原发性颅内恶性肿瘤，发病率高，治疗困难，因其转移快速、侵袭性强而预后极差、且易复发，对患者生命健康造成极大威胁[1-3]。微小RNA(micro RNA，miRNA)是一类内源性的非编码RNA，可与靶基因非翻译区靶向结合，从而调控其翻译表达。miR-495作为一种miRNA，可通过调控多种基因表达而介导肿瘤的发生发展，miR-495在人类胶质瘤、子宫内膜癌、非小细胞肺癌等多种肿瘤中表达下调，促进其表达，可明显抑制癌细胞增殖并促进其凋亡，发挥显著的抑癌作用[4-6]。Notch1基因可调控细胞增殖、凋亡、分化等多种生理进程，并可通过调控细胞周期和上皮间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition，EMT)过程而介导前列腺癌、乳腺癌、口腔鳞癌等多种肿瘤的生长及侵袭转移，下调其表达，可延缓EMT进程，抑制癌细胞增殖，降低其侵袭转移力[7-9]。另外，在关于口腔鳞癌的研究中发现，miR-495可靶向下调Notch1基因表达，进而抑制口腔鳞癌细胞的增殖和侵袭[9]。但miR-495靶向Notch1对神经胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭的影响，目前还未有明确全面的阐述，本研究对此进行初步探索。

    1 材料与方法

    1.1 试剂与细胞

    人神经胶质瘤细胞U87(货号l110238)购买于上海北诺生物科技有限公司；胰蛋白酶-EDTA消化液(货号T1300)、DMEM培养基(货号31600)、优级胎牛血清(货号S9020)、青链霉素混合液(货号P1400)、LipofectamineTM2000(货号11668)、高效RIPA裂解液(货号R0010)、CCK-8试剂盒(货号CA1210)、BCA蛋白浓度测定试剂盒(货号PC0020)、逆转录试剂盒(货号T2240)、结晶紫染色液(货号G1062)购买于北京索莱宝科技有限公司；Opti-MEM培养基(货号31985062)购买于美国Thermo Fisher Scientific公司；AnnexinV/PI凋亡检测试剂盒(货号556547)购买于美国BD公司；miR-495、U6、Notch1、GAPDH引物购买于上海生工生物工程股份有限公司；miR-495 mimics、miR-495 mimics阴性对照购买于上海吉玛基因有限公司；基质胶(货号wlb1062)购买于上海瓦兰生物科技有限公司；RNAiso Plus(货号9108)购买于日本Takara公司；SYBR Green Master Mix(货号A8605)购买于美国ABI公司；兔源Anti-β-actin一抗(货号ab227387)、兔源Anti-caspase-3一抗(货号ab32351)、兔源Anti-Bax一抗(货号ab32503)、兔源Anti-Vimentin一抗(货号ab193555)、兔源Anti-E-cadherin一抗(货号ab76319)、兔源Anti-Notch1一抗(货号ab52627)、羊抗兔二抗(货号ab150077)购买于美国Abcam公司 ......