张金媛，顾银银，葛玲玲，李立文

    (1.张家港第一人民医院针灸康复科，江苏 张家港 215600；2.张家港第一人民医院中医科，江苏 张家港 215600；3.张家港市中医医院针灸科，江苏 张家港 215600)

    失眠是指入睡困难、睡眠中途易醒、睡眠时间减少或睡眠质量低下，对日常工作和生活会造成不同程度的影响[1]。目前，临床常用镇定类药物进行治疗，短期内有效，但长期治疗效果尚未得到证明，镇定类药物会对记忆、反应能力带来一定的影响，同时患者会对镇定类药物产生一定的依赖性[2]。研究[3-4]表明，针灸在治疗失眠的过程中既有良好的疗效，且不良反应方面具有独特的优势，但其作用机制尚不明确。失眠与机体免疫能力下降有关，且TLR/NF-κB通路是介导免疫功能的重要通路，因此推测电针对失眠症的调控作用与TLR/NF-κB通路有关。内关作为八脉交会穴，能宁心安神、宽胸理气，具有主治疗失眠等相关病症的功效[5]。本研究建立失眠症大鼠模型，对双侧内关进行电针，探究电针通过调控TLR/NF-κB通路对失眠症大鼠的作用。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    SPF级、SD雄性大鼠，6周龄，体质量175～230 g，平均(200±15) g，购于南京医科大学，许可证为[生产许可SCXK(苏)2021-0001]。

    1.2 主要材料与仪器

    氯苯丙氨酸(PCPA)购于上海易恩化学技术有限公司；NaOH和HCL溶液购入西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司；安定注射液(地西泮)(国药准字H62020554，甘肃兰药药业集团有限责任公司)；TNF-α、sTNF-RⅡ酶联免疫试剂盒购于上海酶联生物科技有限公司；FITC标记F4/80单抗，PE标记TLR3、TLR4单抗均购于北京百奥莱博科技有限公司；总RNA提取试剂盒购于爱必信(上海)生物科技有限公司；TRIzol试剂盒、逆转录试剂盒及荧光定量PCR试剂盒均购于上海恪敏生物科技有限公司；兔抗大鼠MyD88、TAB2、NF-kB一抗、山羊抗兔二抗均购于北京百奥莱博科技有限公司。

    华佗牌SDZ-Ⅱ电子针疗仪及一次性无菌针灸针(规格：0.25 mm×25 mm)均购于苏州医疗用品厂有限公司；酶联免疫以检测仪(型号：BIOBASE1001，济南来宝医疗器械有限公司)；流式细胞仪[型号：CytoFLEX，贝克曼库尔特国际贸易(上海)有限公司]；美国伯乐高压电泳仪(型号：Powerpac HV，上海奥陆生物科技有限公司)。

    1.3 实验方法 ......