李 阳，张静喆，顾宏刚*

    (1.郑州人民医院/河南中医药大学人民医院消化内科，郑州 450003；2.上海中医药大学附属龙华医院普外科，上海 200032)

    过氧化氢(H2O2)具有很强的氧化性，不仅可以直接氧化细胞膜上的脂质和蛋白质，还可以通过细胞膜与细胞内的铁离子发生反应，生成活性更强的自由基(如OH等)，引起一系列氧化应激反应[1]。选用H2O2诱导正常人肝细胞LO2氧化应激模型，研究升清胶囊六种单体对正常人肝细胞LO2氧化应激模型的修复作用，进一步阐明升清胶囊抗氧化能力，筛选其有效单体成分，并分析其安全性。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞人肝细胞LO2(normal human hepatic cell line) 由中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心提供。

    1.1.2 药物与试剂 98%纯度白藜芦醇苷、白藜芦醇、橙皮苷、大黄酚、大黄素、大黄酸、维生素E(南京泽郎医药科技有限公司)；30% H2O2(上海阿拉丁公司)；RPMI 1640培养基、胰蛋白酶(美国Gibco 公司)；青霉素、硫酸链霉素(华北制药股份有限公司)；胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)；磷酸二氢钠、磷酸氢二钾(国药集团化学试剂有限公司)；噻唑蓝(MTT)(上海谱振生物科技有限公司)；二甲基亚砜(DMSO)(上海生工生物工程有限公司)。

    1.1.3 药物配置 将升清胶囊(上海中医药大学附属龙华医院院内制剂，沪药制字Z05170981，由生大黄、虎杖、陈皮三味中药组成)的六种单体(白藜芦醇苷、白藜芦醇、橙皮苷、大黄酚、大黄素、大黄酸)和维生素E分别用DMSO溶解，若不能充分溶解，则借助超声波溶解。为了减少对试验的影响，DMSO在含药培养液中的最终体积比最好低于0.1%。

    1.1.4 实验仪器 超净工作台(江苏苏净集团安泰公司)；DHG-9203A 型电热恒温干燥箱(上海精密实验设备有限公司)；立式电热压力蒸汽灭菌锅(上海申安医疗器械厂)；电子分析天平、架盘药物天平、精密PH计(上海精密科学仪器有限公司)；ThermoMK3酶标仪、细胞培养箱(美国Thermo公司)；细胞培养板，细胞培养瓶(美国Corning公司)；可调式移液器(德国Eppendorf公司)；Olympus IX71倒置显微镜(日本Olympus公司)；J-301高速冷冻离心机(美国Beckman公司)；低速台式离心机(上海安亭科学仪器厂)；纯水净化仪(美国MiliQ公司)；超声波清洗器(昆山市超声有限公司)；液氮生物容器(成都金凤液氮容器有限公司)；恒温水浴箱(上海精宏实验设备有限公司)；-20℃冰箱(美国ScienTemp公司)；-80℃冰箱(日本三洋公司) ......