王可娜，张 娇，徐家云

    (河南科技大学第一附属医院，河南 洛阳 471000)

    肾缺血再灌注损伤(renal ischemia reperfusion injury，RIRI)是诸多疾病及医疗过程如休克、移植等过程产生的病理生理过程，发病机制复杂，其中肾移植过程中RIRI难以避免，可对移植肾的早期及远期功能带来一定影响，严重影响患者预后[1]。目前，临床仍缺乏有效治疗手段对RIRI起到完美保护作用。因此，探寻有效药物治疗RIRI仍是临床研究热点。西地那非是5型磷酸二酯酶抑制剂，对RIRI具有一定保护作用[2]，但具体作用机制尚未阐明。研究[3]表明，RIRI主要病理改变是缺血引起的氧化应激损伤及肾小管细胞凋亡。抑制凋亡相关因子Fas/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-8(Fas/Caspase-8)通路活化可抑制RIRI大鼠肾小管细胞氧化应激凋亡[4]。目前，有关西地那非对RIRI的保护作用是否与调控Fas/Caspase-8通路有关少见报道，因此本研究基于Fas/Caspase-8通路探究西地那非对RIRI大鼠氧化应激及肾小管细胞凋亡的影响，以期为临床有效防治RIRI改善肾移植患者预后提供一定参考。

    1 主要材料与试剂

    1.1 实验动物

    40只SPF级SD雄性大鼠(10周龄)，体质量180～240 g，平均体质量(213±27)g，购自北京唯尚立德生物科技有限公司，许可证号：SCXK(京)2016-0009。

    1.2 主要试剂与仪器

    盐酸西地那非，国药准字H20143255，购自广州白云山医药集团股份有限公司白云山制药总厂；苏木精-伊红(Hematoxylin-Eosin，HE)染色试剂盒，购自北京百瑞极生物科技有限公司；原位末端标记(TdT-mediateddUTPnickandlabeling，TUNEL)试剂盒购自上海联迈生物工程有限公司；超氧化物歧化酶(superoxide orgotein dismutase，SOD)活性检测试剂盒、丙二醛(malonaldehyde，MDA)含量检测试剂盒均购自南京建成生物研究所；谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)试剂盒，购自上海梵态生物科技有限公司；兔抗鼠凋亡相关因子Fas、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-8(Caspase-8)及β-肌动蛋白(β-actin)单克隆抗体、山羊抗兔HRP二抗 ......