郑再宏，闫锡钊，李 博，丁珍珍

    (沧州市人民医院妇产科，河北 沧州 061000)

    宫颈癌是常见的女性恶性肿瘤疾病，具有较高的发病率和病死率，患者五年存活率仅为20%～30%[1]。肿瘤细胞的迁移是人类癌变过程中的关键步骤，因为它构成了转移的病理生理基础，该过程包括恶性细胞与血管内皮粘连，以便侵入周围组织，其中黏附分子在这一过程中起主要作用[2]。细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion moleclar-1，ICAM-1)是属于β2-整合素家族，有研究显示其在宫颈癌肿瘤细胞中的过度表达与通过粘附内皮细胞的血管侵入有一定相关性，这意味着该分子在转移灶的产生中可能发挥作用[3]。SKAP1是一种免疫细胞接头蛋白，能通过安排和组装多分子信号复合体来协调淋巴细胞的激活和分化，且SKAP1二聚体形成可稳定SLP-76微簇并促进粘附[4-5]。所以ICAM-1和SKAP1的表达在可能免疫调控机制中发挥重要作用，但是其在宫颈癌中的调控机制至今还未见报道。本研究旨在探索宫颈癌中SKAP1与ICAM-1介导的免疫调控机制，为开发针对该靶点的免疫抑制剂提供理论基础。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物与细胞

    人宫颈癌细胞株HeLa，购自北京大学人民医院妇产科实验室。雌性BLAB/c裸鼠30只，5～6周龄，体质量18～20 g，购自上海市计划生育科学研究所实验动物经营部，动物生产许可：SCXK(沪)2018-0006，在沧州医学高等专科学校动物实验中心饲养，动物使用许可证号SYXK(冀)2019-006。恒温18～22℃，湿度50%～80%，密闭无菌环境。本研究参照中国医学科学院医学实验动物物研究所实验动物使用与管理委员会执行标准。

    1.2 试剂与仪器

    干扰质粒，购自美国Invitrogen公司；DMEM高糖培养基，购自美国Gibco公司；0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液，购自北京索莱宝公司；胎牛血清，购自杭州四季青公司；TrizolTM RNA Isolation Reagent购自美国GIBCO公司；M-MLV reverse transcriptase，购自上海泽叶生物科技有限公司；质粒抽提试剂盒，购自美国Genomed公司；二喹啉甲酸(bicinchoninic acid，BCA)蛋白定量试剂盒、免疫组化试剂盒均购自上海雅酶生物医药科技有限公司；DAB显色试剂盒，购自北京中山生物技术有限公司；鼠抗人SKAP1单克隆抗体、鼠抗人ICAM-1单克隆抗体、鼠抗人GAPDH单克隆抗体及辣根过氧化酶标记二抗均购自美国Abcam公司；Western blot化学发光工作液 ......