刘 鑫，温 健，李剑男

    (长春中医药大学药学院，长春 130117)

    常春藤皂苷B 是两头尖中重要的活性成分，但目前对其抗氧化活性研究较少，本研究以常春藤皂苷B 作为研究对象，采用电子自旋共振仪探究其对于烷基自由基、羟基自由基和DPPH 自由基的清除作用。同时以Vero 细胞作为研究模型，研究其对过氧化氢诱导的Vero 细胞的保护作用及其对细胞内活性氧生成速率的影响，探讨常春藤皂苷B 的抗氧化作用，为深入研究常春藤皂苷B 抗氧化的机制奠定基础。

    1 试剂和仪器

    两头尖药材购于吉林宏检大药房，经长春中医药大学姜大成教授鉴定为正品两头尖。TU1810 紫外可见分光光度计(普析，中国)，核磁共振光谱仪(安捷伦，美国)，酶联免疫测定仪(伯乐，美国)，电子自旋共振光谱仪(JEOL，日本)，2，2-偶氮二(2-甲基丙基咪)二盐酸盐(AAPH)，2，2-二苯基-1-苦基肼(DPPH)，α-(4-吡啶基-1-氧)硝酮(POBN)，5，5-二甲基-1-二氢吡咯甲基氮芥(DMPO)(sigma，美国)，其他试剂均分析纯。

    2 实验方法

    2.1 两头尖总皂苷的制备

    取两头尖药材1 kg 粉碎，用60%乙醇冷浸法提取至提取液颜色消失，每次用7 倍量的乙醇放在恒温振床中，室温下以120 rpm 提取24 h。过滤，合并滤液并用旋转蒸发仪回收乙醇，将其水溶液加到大孔树脂D101 色谱柱中，蒸馏水除杂，以60%乙醇洗脱，洗脱至薄层检识为阴性，合并洗脱液，回收乙醇。

    2.2 常春藤皂苷B 的纯化和结构鉴定

    取两头尖总皂苷5 g，用硅胶柱色谱进行分离，以CHCl3-MeOH-H2O(6:1:3)作为洗脱剂进行洗脱，采用薄层色谱法检识并合并相同组分，之后采用薄层色谱法 ......