梁国强，李宇卫，沈晓峰，尤君怡，张国栋，华永庆

    (1.南京中医药大学附属苏州市中医医院中心实验室，江苏 苏州 215009；2.南京中医药大学附属苏州市中医医院骨伤科，江苏 苏州 215009；3.南京中医药大学附属苏州市中医医院康复科，江苏 苏州 215009；4.南京中医药大学药学院，南京 210023)

    现代中医学把骨质疏松归为“骨痿”证的讨论范畴。依据其病位在骨而主要病机为“髓枯骨痿”，基于中医“肾主骨”的理论，骨病专家形成共识的“补肾壮骨”的治则[1]。中医学强调的“髓充则骨养”与骨髓间充质干细胞具有多向分化潜能有机相映[2]。目前，骨病研究者[3]认为，在调控骨髓间充质干细胞分化以及骨形成中起着积极的作用的Wnt/β-Catenin信号通路是骨质疏松治疗的重要潜在靶点之一。在团队前期研究表明，临床有效抗骨质疏松症的吴门骨密葆方抑制Wnt/β-连环蛋白(β-Catenin)信号通路[4]，同时激活成骨细胞Runt相关转录因子2(Recombinant Runt Related Transcription Factor 2，RUNX2)mRNA，促进骨形成[5]。分泌型蛋白Dickkopf-1(DKK-1)被确认为Wnt/β-catenin信号通路的抑制剂，其与Wnt蛋白竞争性地直接与Wnt共受体LRP5/6结合，或者间接与其另外两类受体Kremen和LRP结合而形成三聚体，从而抑制Wnt蛋白活性[6]。本研究旨在探讨吴门骨密葆方治疗骨质疏松的分子生物学机制与Wnt/β-catenin信号通路的相关性。

    1 材料和方法

    1.1 实验动物和细胞

    选用6周龄SPF级SD雄性大鼠25只，体质量280～300 g。制备正常血清及吴门骨密葆方含药血清，购于昭衍(苏州)新药研究中心有限公司，饲养于苏州大学医学实验动物中心SPF级实验室，许可证号分别为SCXK(苏)2018-0006和SYXK(苏)2021-0065。SD大鼠骨髓间充质干细胞由深圳市豪地华拓生物科技有限公司代购(进口货号：HTX2393)，将此细胞置于37℃、体积分数5%的CO2培养箱内常规培养。每24 h更换液1次，待细胞长至近铺满细胞培养瓶底时，应用0.25%的胰酶消化，按1:3(接种浓度3×104·mL-1)传至第3代应用于实验 ......