TGM2高表达对GES1细胞生长增殖的影响(2)
2 结果2.1 pcDNA3.1-TGM2真核表达质粒的重组
提取MGC803细胞总RNA,用逆转录产物作为模板,加入TGM2引物,经PCR扩增,TGM2扩增产物回收、酶切、连接、转化,经HindIII和XhoI酶切(图1)和测序鉴定,获得pCDNA3.1-TGM2真核表达质粒,测序后序列与目的序列完全一致。
2.2 建立TGM2稳定高表达GES1细胞系
将pcDNA3.1-TGM2真核表达质粒(pCDNA3.1质粒为对照)转染GES1细胞,经G418筛选2周,汇合克隆培养,建立TGM2稳定高表达的GES1细胞系,即GES1-TGM2细胞(GES1- pcDNA3.1为对照)。经细胞免疫荧光与Western-blot检测GES1细胞中TGM2表达情况,结果显示,GES1-TGM2细胞中TGM2蛋白表达明显高于GES1- pcDNA3.1细胞(图2)。
A:细胞免疫荧光观察GES1细胞中TGM2蛋白的表达 ......
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