抗炎寡肽EA—230的固相合成(2)
在步骤(1)的树脂中加入Fmoc-Val-OH(1.18g)、DIEA(2.1ml)、DCM 50ml,室温搅拌反应2小时,抽滤除去溶液,继续加入Fmoc-Val-OH(1.07g)、HOBt(0.85g)、DIC(0.98ml)、DMF适量,室温反应1小时,抽滤除去溶液,树脂用30ml异丙醇和30ml DMF各进行洗涤两次,得到FmoFmoc-Val-2-CTC Resin肽树脂;
(3)将步骤(2)树脂肽中加入30ml 20%哌啶的DMF溶液,室温搅拌反应30分钟。抽滤去除溶液,再用50ml异丙醇和50ml DMF各进行洗涤两次,得到H-Val-2-CTC Resin肽树脂,茚三酮检测显阳性。
(4)合成Fmoc-Gly-Val-2-CTC Resin肽树脂
在步骤(3)的树脂中加入Fmoc-Gly-OH(1.88g,2当量)、HOBt(1.28g,3当量)、DIC(1.47ml,3当量)、DIEA(2.1ml,4当量 )、DMF100ml,室温反应2小时,茚三酮检测显阴性,抽滤去除溶液,再用50ml异丙醇和50ml DMF各进行洗涤两次,得到Fmoc-Gly-Val-2-CTC Resin肽树脂;
(5)将步骤(4)树脂肽中加入50ml 20%哌啶的DMF溶液,室温搅拌反应30分钟。茚三酮检测显阳性,抽滤去除溶液,再用50ml异丙醇和50ml DMF各进行洗涤两次,得到H-Gly-Val-2-CTC Resin肽树脂。
(6)合成H-Ala-Gln(Trt)-Gly-Val-2-CTC Resin肽树脂
重复步骤(4)~(5),依次连接Fmoc-Gln(trt)-OH、Fmoc-Ala-OH,得到Ala-Gln(Trt)-Gly-Val-2-CTC Resin肽树脂;树脂肽最后用50ml甲醇洗涤三次,干燥得4.5g H-Ala-Gln(Trt)-Gly-Val-2-CTC Resin肽树脂。
(7)配制30ml树脂切割液:将三氟乙酸、三异丙基硅烷、水、苯甲硫醚按体积比为88:5:3:4加入到烧杯内搅拌混合;
树脂切割:将4.5g树脂加入到上述配置的30ml切割液中,室温搅拌反应1.5小时,抽滤,滤液控制不高于40℃减压脱除至基本无馏分,向其中加入30ml甲基叔丁基醚,超声分散2小时后静置1小时,过滤,固体用10ml甲基叔丁基醚洗涤,干燥得白色粗品肽1.5g。
二、结果讨论
由图中从分析图可以看出纯度>97%,得到純品1.12g,产率 95.72%。
三、结论
本文介绍了一种固相法合成EA-230的方法,具有操作简单快捷,纯度高,易于分离纯化,可重复性高的特点。相较于传统的液相合成方案,解决了谷氨酰胺溶解性差和不稳定的特点,合成时间短,操作步骤少,较大的减少了生产时间和纯化成本,为以后批量生产提供了一种行之有效而又简单便捷的方法。, 百拇医药(陈科 李乾 郭添 李晨 杨小琳 赵金礼)
(3)将步骤(2)树脂肽中加入30ml 20%哌啶的DMF溶液,室温搅拌反应30分钟。抽滤去除溶液,再用50ml异丙醇和50ml DMF各进行洗涤两次,得到H-Val-2-CTC Resin肽树脂,茚三酮检测显阳性。
(4)合成Fmoc-Gly-Val-2-CTC Resin肽树脂
在步骤(3)的树脂中加入Fmoc-Gly-OH(1.88g,2当量)、HOBt(1.28g,3当量)、DIC(1.47ml,3当量)、DIEA(2.1ml,4当量 )、DMF100ml,室温反应2小时,茚三酮检测显阴性,抽滤去除溶液,再用50ml异丙醇和50ml DMF各进行洗涤两次,得到Fmoc-Gly-Val-2-CTC Resin肽树脂;
(5)将步骤(4)树脂肽中加入50ml 20%哌啶的DMF溶液,室温搅拌反应30分钟。茚三酮检测显阳性,抽滤去除溶液,再用50ml异丙醇和50ml DMF各进行洗涤两次,得到H-Gly-Val-2-CTC Resin肽树脂。
(6)合成H-Ala-Gln(Trt)-Gly-Val-2-CTC Resin肽树脂
重复步骤(4)~(5),依次连接Fmoc-Gln(trt)-OH、Fmoc-Ala-OH,得到Ala-Gln(Trt)-Gly-Val-2-CTC Resin肽树脂;树脂肽最后用50ml甲醇洗涤三次,干燥得4.5g H-Ala-Gln(Trt)-Gly-Val-2-CTC Resin肽树脂。
(7)配制30ml树脂切割液:将三氟乙酸、三异丙基硅烷、水、苯甲硫醚按体积比为88:5:3:4加入到烧杯内搅拌混合;
树脂切割:将4.5g树脂加入到上述配置的30ml切割液中,室温搅拌反应1.5小时,抽滤,滤液控制不高于40℃减压脱除至基本无馏分,向其中加入30ml甲基叔丁基醚,超声分散2小时后静置1小时,过滤,固体用10ml甲基叔丁基醚洗涤,干燥得白色粗品肽1.5g。
二、结果讨论
由图中从分析图可以看出纯度>97%,得到純品1.12g,产率 95.72%。
三、结论
本文介绍了一种固相法合成EA-230的方法,具有操作简单快捷,纯度高,易于分离纯化,可重复性高的特点。相较于传统的液相合成方案,解决了谷氨酰胺溶解性差和不稳定的特点,合成时间短,操作步骤少,较大的减少了生产时间和纯化成本,为以后批量生产提供了一种行之有效而又简单便捷的方法。, 百拇医药(陈科 李乾 郭添 李晨 杨小琳 赵金礼)