抗炎寡肽EA—230的固相合成(2)
在步骤(1)的树脂中加入Fmoc-Val-OH(1.18g)、DIEA(2.1ml)、DCM 50ml，室温搅拌反应2小时，抽滤除去溶液，继续加入Fmoc-Val-OH(1.07g)、HOBt(0.85g)、DIC(0.98ml)、DMF适量，室温反应1小时，抽滤除去溶液，树脂用30ml异丙醇和30ml DMF各进行洗涤两次，得到FmoFmoc-Val-2-CTC Resin肽树脂；
(3)将步骤(2)树脂肽中加入30ml 20%哌啶的DMF溶液，室温搅拌反应30分钟。抽滤去除溶液，再用50ml异丙醇和50ml DMF各进行洗涤两次，得到H-Val-2-CTC Resin肽树脂，茚三酮检测显阳性。
(4)合成Fmoc-Gly-Val-2-CTC Resin肽树脂
在步骤(3)的树脂中加入Fmoc-Gly-OH(1.88g，2当量)、HOBt(1.28g，3当量)、DIC(1.47ml，3当量)、DIEA(2.1ml，4当量 )、DMF100ml，室温反应2小时，茚三酮检测显阴性，抽滤去除溶液，再用50ml异丙醇和50ml DMF各进行洗涤两次，得到Fmoc-Gly-Val-2-CTC Resin肽树脂；
(5)将步骤(4)树脂肽中加入50ml 20%哌啶的DMF溶液，室温搅拌反应30分钟。茚三酮检测显阳性，抽滤去除溶液，再用50ml异丙醇和50ml DMF各进行洗涤两次，得到H-Gly-Val-2-CTC Resin肽树脂。
(6)合成H-Ala-Gln(Trt)-Gly-Val-2-CTC Resin肽树脂
重复步骤(4)～(5)，依次连接Fmoc-Gln(trt)-OH、Fmoc-Ala-OH，得到Ala-Gln(Trt)-Gly-Val-2-CTC Resin肽树脂；树脂肽最后用50ml甲醇洗涤三次，干燥得4.5g H-Ala-Gln(Trt)-Gly-Val-2-CTC Resin肽树脂。
(7)配制30ml树脂切割液：将三氟乙酸、三异丙基硅烷、水、苯甲硫醚按体积比为88：5：3：4加入到烧杯内搅拌混合；
树脂切割：将4.5g树脂加入到上述配置的30ml切割液中，室温搅拌反应1.5小时，抽滤，滤液控制不高于40℃减压脱除至基本无馏分，向其中加入30ml甲基叔丁基醚，超声分散2小时后静置1小时，过滤，固体用10ml甲基叔丁基醚洗涤，干燥得白色粗品肽1.5g。
二、结果讨论
由图中从分析图可以看出纯度>97%，得到純品1.12g，产率 95.72%。
三、结论
本文介绍了一种固相法合成EA-230的方法，具有操作简单快捷，纯度高，易于分离纯化，可重复性高的特点。相较于传统的液相合成方案，解决了谷氨酰胺溶解性差和不稳定的特点，合成时间短，操作步骤少，较大的减少了生产时间和纯化成本，为以后批量生产提供了一种行之有效而又简单便捷的方法。, 百拇医药(陈科 李乾 郭添 李晨 杨小琳 赵金礼)
(3)将步骤(2)树脂肽中加入30ml 20%哌啶的DMF溶液，室温搅拌反应30分钟。抽滤去除溶液，再用50ml异丙醇和50ml DMF各进行洗涤两次，得到H-Val-2-CTC Resin肽树脂，茚三酮检测显阳性。
(4)合成Fmoc-Gly-Val-2-CTC Resin肽树脂
在步骤(3)的树脂中加入Fmoc-Gly-OH(1.88g，2当量)、HOBt(1.28g，3当量)、DIC(1.47ml，3当量)、DIEA(2.1ml，4当量 )、DMF100ml，室温反应2小时，茚三酮检测显阴性，抽滤去除溶液，再用50ml异丙醇和50ml DMF各进行洗涤两次，得到Fmoc-Gly-Val-2-CTC Resin肽树脂；
(5)将步骤(4)树脂肽中加入50ml 20%哌啶的DMF溶液，室温搅拌反应30分钟。茚三酮检测显阳性，抽滤去除溶液，再用50ml异丙醇和50ml DMF各进行洗涤两次，得到H-Gly-Val-2-CTC Resin肽树脂。
(6)合成H-Ala-Gln(Trt)-Gly-Val-2-CTC Resin肽树脂
重复步骤(4)～(5)，依次连接Fmoc-Gln(trt)-OH、Fmoc-Ala-OH，得到Ala-Gln(Trt)-Gly-Val-2-CTC Resin肽树脂；树脂肽最后用50ml甲醇洗涤三次，干燥得4.5g H-Ala-Gln(Trt)-Gly-Val-2-CTC Resin肽树脂。
(7)配制30ml树脂切割液：将三氟乙酸、三异丙基硅烷、水、苯甲硫醚按体积比为88：5：3：4加入到烧杯内搅拌混合；
树脂切割：将4.5g树脂加入到上述配置的30ml切割液中，室温搅拌反应1.5小时，抽滤，滤液控制不高于40℃减压脱除至基本无馏分，向其中加入30ml甲基叔丁基醚，超声分散2小时后静置1小时，过滤，固体用10ml甲基叔丁基醚洗涤，干燥得白色粗品肽1.5g。
二、结果讨论
由图中从分析图可以看出纯度>97%，得到純品1.12g，产率 95.72%。
三、结论
本文介绍了一种固相法合成EA-230的方法，具有操作简单快捷，纯度高，易于分离纯化，可重复性高的特点。相较于传统的液相合成方案，解决了谷氨酰胺溶解性差和不稳定的特点，合成时间短，操作步骤少，较大的减少了生产时间和纯化成本，为以后批量生产提供了一种行之有效而又简单便捷的方法。, 百拇医药(陈科 李乾 郭添 李晨 杨小琳 赵金礼)