同时测定黄芪药材中毛蕊异黄酮葡萄糖苷和黄芪甲苷的方法建立
【摘 要】目的：分析应用高效液相色谱法同时测定黄芪两种成分毛蕊异黄酮葡萄糖苷与黄芪甲苷的可行性。方法：取黄芪药材研末后制备成甲醇供试液，然后制备两种成分的对照品溶液，以乙腈-水作为流动相，分别在210nm和260nm进行测定。分析该方法测定两种成分的线性关系、重复性和含量状况。结果：毛蕊异黄酮葡萄糖苷与黄芪甲苷的含量同峰面积具有较好的线性关系，毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量为0.029%，相对标准偏差为0.217，黄芪甲苷含量为0.031%，相对标准偏差为0.265。结论；应用高效液相色谱法同时测定黄芪两种成分毛蕊异黄酮葡萄糖苷与黄芪甲苷具有较高的可行性和可重复性，且操作便捷，线性关系较好。
【关键词】高效液相色谱法；含量；黄芪；线性关系；重复性
【中图分类号】R36.25 【文献标识码】B 【文章编号】2095-6851(2018)08--02
由于中药材中所含组分具有多样性和复杂性，单次仅测定一种组分的检验方法效率较低，无法满足质检和药厂等机构实际应用需求，因此近年来研究多集中于同时检测中药材中所含多种组分的方法[1]。随着检测技术的发展和新型仪器的出现，多种检测技术逐渐应用于中药质量的检测控制中[2]。黄芪中多含的毛蕊异黄酮葡萄糖苷与黄芪甲苷是判断其质量的主要成分，因此本研究分析应用高效液相色谱法同时测定黄芪两种成分毛蕊异黄酮葡萄糖苷与黄芪甲苷的可行性，从而为分析黄芪药材的质量提供依据。
1 试剂和器材
本研究试剂包含乙腈、毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品、甲醇与黄芪甲苷對照品，选取高效液相色谱仪Agilent、检测仪G1315B和色谱站作为检测器材。
2 方法
取黄芪药材大约3g进行研末后精密称量，制备成体积为50mL的甲醇溶液，再进行超声溶解1h混匀，加入减少重量的甲醇并混合均匀，对溶液进行过滤后作为供试液备用。然后，制备两种成分毛蕊异黄酮葡萄糖苷与黄芪甲苷的对照品溶液，精密称量后与甲醇腈混匀。将10μL的对照品溶液、供试液加入色谱柱，选取色谱柱规格为250mm×4.6mm，以甲醇-乙腈-水作为流动相进行梯度洗脱，分别在210nm和260nm条件下进行测定，在前20min设置波长为260nm，然后调整波长为210nm。分析该方法测定两种成分的线性关系、重复性和含量状况。线性关系分析：分别取不同体积(0.5mL、1mL、2mL、5mL和10mL)的对照品溶液，用甲醇分别配制成10mL溶液，再取各溶液20μL分别加入色谱柱测定各溶液中两种成分毛蕊异黄酮葡萄糖苷与黄芪甲苷的含量并得出峰面积和成分含量的方程式，分析两者的线性关系。
重复性分析：分别取6份同种待测黄芪药材，分别指标成供试液并进行检测，将6份的平均值作为最终黄芪药材中毛蕊异黄酮葡萄糖苷与黄芪甲苷的含量，并计算相对标准偏差=标准偏差/平均值。
3 结果
毛蕊异黄酮葡萄糖苷与黄芪甲苷的含量同峰面积具有较好的线性关系，其中前者的线性方程式为Y=14.0×105X+128.25，相关系数r=0.998，后者的线性方程式为Y=15.9×105X+625.80，相关系数r=0.998，毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量为0.029%，相对标准偏差为0.217，黄芪甲苷含量为0.031%，相对标准偏差为0.265，对照品溶液和供试液的色谱图见图1。
4 讨论
本研究在测试试验中发现，采用乙腈-水作为流动相能够基线分离黄芪药材中所含的两种待测成分，分离效果良好，且同王俊等[3]的研究中所采用的甲醇-乙腈、甲酸两种流动相相比，该流动相的检测经济成本较低，因此本研究最终选取该流动相，成英等[4]的文献研究中也选取乙腈-水作为流动相，与本研究一致。另外，测定试验初期将不同超声溶解时间下所测定结果进行比较，得出在1h时两种组分的含量最高，即超声溶解1h混匀时能够保证供试液中所含的成分被有效地提取，因此本研究选取超声溶解时间为1h。在本研究的结果中发现，毛蕊异黄酮葡萄糖苷与黄芪甲苷的含量同峰面积具有较好的线性关系，毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量为0.029mg/g，相对标准偏差为0.217，黄芪甲苷含量为0.031mg/g，相对标准偏差为0.265，可见应用高效液相色谱法同时测定黄芪两种成分毛蕊异黄酮葡萄糖苷与黄芪甲苷具有较高的可行性和可重复性，且操作便捷，线性关系较好。通过同时测定黄芪药材中多种组分，能够有效地提高质检效率，保证较高的质检精确度，节省药材检测等待时间，为中药厂投入生产和药材进行销售奠定基础。另外，高效液相色谱法还可测定中药饮片[5]、中成药[6]中所含各成分的含量，今后还需进一步分析黄芪药材中其他成分和中成药的检测。
综上所述，应用高效液相色谱法同时测定黄芪两种成分毛蕊异黄酮葡萄糖苷与黄芪甲苷具有较高的可行性和可重复性，且操作便捷，线性关系较好。
参考文献
孙平.中药鉴定中现代分析技术的有效运用分析[J].临床医药文献电子杂志，2016，3(46)：9254，9256.
叶飞，王亚丽，魏娟娟，等.黄芪中黄芪甲苷含量测定的最新研究进展[J].宁夏师范学院学报，2018，39(04)：52-56.
王俊，冷湘静，高锦飚.HPLC同时测定参坤养血颗粒中的毛蕊异黄酮葡萄糖苷、黄芪甲苷、丹参素和党参炔苷[J].中国药师，2014，17(7)：1138-1140.
成英，封加福.HPLC同时测定黄芪药材中毛蕊异黄酮葡萄糖苷和黄芪甲苷[J].中国实验方剂学杂志，2013，19(11)：115-117.
周娟娟，秦亚东，汪荣斌，等.基于化学计量学结合超高效液相色谱指纹图谱评价中药材防己质量[J].现代中药研究与实践，2018，32(02)：62-65.
邹小雅，谭梅英，廖丽锦，等.高效液相色谱法同时测定参芪扶正注射液中党参炔苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量[J].中国医院用药评价与分析，2018(05)：586-587，591. (王静)
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【中图分类号】R36.25 【文献标识码】B 【文章编号】2095-6851(2018)08--02
由于中药材中所含组分具有多样性和复杂性，单次仅测定一种组分的检验方法效率较低，无法满足质检和药厂等机构实际应用需求，因此近年来研究多集中于同时检测中药材中所含多种组分的方法[1]。随着检测技术的发展和新型仪器的出现，多种检测技术逐渐应用于中药质量的检测控制中[2]。黄芪中多含的毛蕊异黄酮葡萄糖苷与黄芪甲苷是判断其质量的主要成分，因此本研究分析应用高效液相色谱法同时测定黄芪两种成分毛蕊异黄酮葡萄糖苷与黄芪甲苷的可行性，从而为分析黄芪药材的质量提供依据。
1 试剂和器材
本研究试剂包含乙腈、毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品、甲醇与黄芪甲苷對照品，选取高效液相色谱仪Agilent、检测仪G1315B和色谱站作为检测器材。
2 方法
取黄芪药材大约3g进行研末后精密称量，制备成体积为50mL的甲醇溶液，再进行超声溶解1h混匀，加入减少重量的甲醇并混合均匀，对溶液进行过滤后作为供试液备用。然后，制备两种成分毛蕊异黄酮葡萄糖苷与黄芪甲苷的对照品溶液，精密称量后与甲醇腈混匀。将10μL的对照品溶液、供试液加入色谱柱，选取色谱柱规格为250mm×4.6mm，以甲醇-乙腈-水作为流动相进行梯度洗脱，分别在210nm和260nm条件下进行测定，在前20min设置波长为260nm，然后调整波长为210nm。分析该方法测定两种成分的线性关系、重复性和含量状况。线性关系分析：分别取不同体积(0.5mL、1mL、2mL、5mL和10mL)的对照品溶液，用甲醇分别配制成10mL溶液，再取各溶液20μL分别加入色谱柱测定各溶液中两种成分毛蕊异黄酮葡萄糖苷与黄芪甲苷的含量并得出峰面积和成分含量的方程式，分析两者的线性关系。
重复性分析：分别取6份同种待测黄芪药材，分别指标成供试液并进行检测，将6份的平均值作为最终黄芪药材中毛蕊异黄酮葡萄糖苷与黄芪甲苷的含量，并计算相对标准偏差=标准偏差/平均值。
3 结果
毛蕊异黄酮葡萄糖苷与黄芪甲苷的含量同峰面积具有较好的线性关系，其中前者的线性方程式为Y=14.0×105X+128.25，相关系数r=0.998，后者的线性方程式为Y=15.9×105X+625.80，相关系数r=0.998，毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量为0.029%，相对标准偏差为0.217，黄芪甲苷含量为0.031%，相对标准偏差为0.265，对照品溶液和供试液的色谱图见图1。
4 讨论
本研究在测试试验中发现，采用乙腈-水作为流动相能够基线分离黄芪药材中所含的两种待测成分，分离效果良好，且同王俊等[3]的研究中所采用的甲醇-乙腈、甲酸两种流动相相比，该流动相的检测经济成本较低，因此本研究最终选取该流动相，成英等[4]的文献研究中也选取乙腈-水作为流动相，与本研究一致。另外，测定试验初期将不同超声溶解时间下所测定结果进行比较，得出在1h时两种组分的含量最高，即超声溶解1h混匀时能够保证供试液中所含的成分被有效地提取，因此本研究选取超声溶解时间为1h。在本研究的结果中发现，毛蕊异黄酮葡萄糖苷与黄芪甲苷的含量同峰面积具有较好的线性关系，毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量为0.029mg/g，相对标准偏差为0.217，黄芪甲苷含量为0.031mg/g，相对标准偏差为0.265，可见应用高效液相色谱法同时测定黄芪两种成分毛蕊异黄酮葡萄糖苷与黄芪甲苷具有较高的可行性和可重复性，且操作便捷，线性关系较好。通过同时测定黄芪药材中多种组分，能够有效地提高质检效率，保证较高的质检精确度，节省药材检测等待时间，为中药厂投入生产和药材进行销售奠定基础。另外，高效液相色谱法还可测定中药饮片[5]、中成药[6]中所含各成分的含量，今后还需进一步分析黄芪药材中其他成分和中成药的检测。
综上所述，应用高效液相色谱法同时测定黄芪两种成分毛蕊异黄酮葡萄糖苷与黄芪甲苷具有较高的可行性和可重复性，且操作便捷，线性关系较好。
参考文献
孙平.中药鉴定中现代分析技术的有效运用分析[J].临床医药文献电子杂志，2016，3(46)：9254，9256.
叶飞，王亚丽，魏娟娟，等.黄芪中黄芪甲苷含量测定的最新研究进展[J].宁夏师范学院学报，2018，39(04)：52-56.
王俊，冷湘静，高锦飚.HPLC同时测定参坤养血颗粒中的毛蕊异黄酮葡萄糖苷、黄芪甲苷、丹参素和党参炔苷[J].中国药师，2014，17(7)：1138-1140.
成英，封加福.HPLC同时测定黄芪药材中毛蕊异黄酮葡萄糖苷和黄芪甲苷[J].中国实验方剂学杂志，2013，19(11)：115-117.
周娟娟，秦亚东，汪荣斌，等.基于化学计量学结合超高效液相色谱指纹图谱评价中药材防己质量[J].现代中药研究与实践，2018，32(02)：62-65.
邹小雅，谭梅英，廖丽锦，等.高效液相色谱法同时测定参芪扶正注射液中党参炔苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量[J].中国医院用药评价与分析，2018(05)：586-587，591. (王静)
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