藤黄不同炮制品急性毒性研究
【摘要】目的:比较生藤黄和清水制藤黄的急性毒性。方法:通过预实验计算出生藤黄和清水制藤黄的最小全致死量Dm和最大全不致死量Dn,进行生藤黄和清水制藤黄对小鼠的急性毒性试验。 结果:急性毒性结果显示,生藤黄醇提物对小鼠单次ig给药的半数致死量(LD50)为2422.95 mg·kg-1 ,95%可信区间为1935.154~3070.311 mg·kg-1,清水制藤黄的半数致死量为LD50为2791.368 mg·kg-1,95%可信区间为2074.983~3543.582mg·kg-1。 结论:藤黄各炮制品的急毒实验结果表明,藤黄经炮制后毒性显著降低。
【关键词】生藤黄醇提物;清水制藤黄醇提物;急性毒性;半数致死量;半数致死浓度
[Abstract]Objective:To analyze the toxicity changes of the Gambogic. Methods: The acute toxicity of Gambogic and its processed products was compared on mice in accordance with classical test method for acute toxicity and experimental data were calculated with bliss method. Results: acute toxicity results showed that students gambogic alcohol extract on mice given a single oral half lethal dose (LD50) 2422.95 mg·kg-1, 95% confidence interval for 1935.154~3070.311 mg·kg-1, half of the water system of Garcinia lethal amount of LD50 for 2791.368mg·kg-195% confidence interval for2074.983~3543.582mg·kg-1.Conclusion:The toxicity of gambogic decreased significantly after processing.
【Key words】raw gamboge alcohol extract; water system of gambogic alcohol extract; acute toxicity; median lethal dose; median lethal concentration
【中图分类号】R821.4+2【文献标识码】A 【文章编号】2095-6851(2019)07-057-01
藤黄为藤黄科藤黄属植物藤黄和印支藤黄的干燥胶树脂,又名海藤、玉皇、月黄,始载于《海药本草》[1]木部,其呈圆柱状或不规则块状物,色黄质脆,味酸、辛、涩,有毒。藤黃具有散结、解毒、止血、杀虫的功效。由于藤黄毒性较大,用药安全不易保证,一大程度限制了临床应用[2-5]。本实验比较了藤黄生品醇提物和清水制品醇提物的急性毒性和各炮制品体外培养小鼠脾淋巴细胞的方法,探讨藤黄各炮制品的毒性大小。
1 材料
1.1 药材和动物 藤黄购自安徽亳州药材市场。昆明种小鼠,(20±2)g,雌雄各半,上海斯莱克实验动物有限公司。
1.2 试剂 RPMI1640培养基(HyClone,批号:NZM1294);小牛血清(四季青,批号:150208);乙醇等分析试剂均购自上海国药集团试剂有限公司。
2 方法
2.1 藤黄各炮制品醇提物的制备
2.1.1 藤黄生品 将原药材拣去杂质,轧成粗粒。
2.1.2 藤黄清水制品 分别取生藤黄粗粉,放入烧杯内,加水10倍量。煮沸,滤过,不断搅拌,中途添加沸水,连续煮2h,浓缩至糊状,取出,低温干燥,制备得到2h的清水制藤黄。
2.1.3 95%乙醇提取生藤黄、清水制藤黄:取生藤黄、清水制藤黄各100g,分别加入6、4、2倍量乙醇提取3次,时间分别为20、15、15min,滤过,合并滤液,回收乙醇,55℃下干燥,取出备用。
2.2 小鼠急性毒性正式实验
取小白鼠110只,雌雄各半,按体重随机分为11组,每组10只。组间计量为1:0.65。实验前禁食不禁水16h,按0.2ml·g-1进行灌胃1次,空白组给予等体积的0.8%CMC-Na溶液。给药后连续观察14d。观察小鼠的毛色、精神、动度、进食、饮水等一般情况、中毒症状及死亡情况。
2.3 统计方法 用Bliss法计算半数致死量(LD50),半数抑制浓度(IC50),用SPSS18.0软统计分析。
3 结果分析
3.1 小鼠急性毒性
3.1.1 小鼠死亡情况
根据表1小鼠死亡数,计算出生藤黄醇提物对小鼠的半数致死量为2422.95 mg·kg-1 ,95%可信区间为1935.154~3070.311 mg·kg-1。根据表2小鼠死亡数,计算出清水制藤黄对小鼠的半数致死量为2791.368 mg·kg-1 95%可信区间为2074.983~3543.582mg·kg-1 。
3.1.2 临床表现
在一次性ig给药后2h,小鼠出现不同程度的腹泻,便便黄色、肛门口黄色、活动滞呆、饮食减少、精神状态萎靡、被毛蓬松、眼不睁或半睁。给药4h后,高剂量组出现动物死亡,小鼠脱水、腹泻致死,全身紧缩,僵硬。给药后2d~7d都出现小鼠死亡,7d后活动开始正常,饮食正常、大便正常,不在出现小鼠死亡。
3.1.3 生藤黄和清水制藤黄毒性比较
4 讨论
藤黄经加热反复煮炮制后,其毒性在一定程度上有所下降,加热可能是降低藤黄毒性的主要机理。生藤黄和清水制藤黄体外对小鼠脾淋巴细胞都有致炎作用,生品>清水制品,说明经炮制后藤黄毒性有所降低。综上所述,藤黄经炮制后毒性在一定程度上有所下降,但深入探讨炮制减毒机理提供具体作用靶点的实验有待进一步研究。
参考文献:
[1] 李珣.尚志钧辑校.海药本草[M].芜湖:皖南医学院科研科印,1983:26.
[2] 贺百花,彭求贤,高倩.中药藤黄药理作用研究进展[J].河北北方学院学报,2009,26 (5):71.
[3] 徐文龙,杨柏霖.中药藤黄药理作用的研究进展[J].现代中西医结合杂志,2013,22(11):1239.王园园,汪盈盈.中药藤黄研究进展[J].长江大学学报,2014,23(11):50.
[4] 欧水平,王森,杨启悦等.有毒中药藤黄炮制“减毒增效”作用的研究进展[J].中草药,2011, 42(12):2560.
[5] 丁安伟,束晓云,张丽,唐于平.甘遂饮片的毒效物质基础研究[C].全国第8届天然药物资源学术研讨会论文集,656., http://www.100md.com(赵琴)
【关键词】生藤黄醇提物;清水制藤黄醇提物;急性毒性;半数致死量;半数致死浓度
[Abstract]Objective:To analyze the toxicity changes of the Gambogic. Methods: The acute toxicity of Gambogic and its processed products was compared on mice in accordance with classical test method for acute toxicity and experimental data were calculated with bliss method. Results: acute toxicity results showed that students gambogic alcohol extract on mice given a single oral half lethal dose (LD50) 2422.95 mg·kg-1, 95% confidence interval for 1935.154~3070.311 mg·kg-1, half of the water system of Garcinia lethal amount of LD50 for 2791.368mg·kg-195% confidence interval for2074.983~3543.582mg·kg-1.Conclusion:The toxicity of gambogic decreased significantly after processing.
【Key words】raw gamboge alcohol extract; water system of gambogic alcohol extract; acute toxicity; median lethal dose; median lethal concentration
【中图分类号】R821.4+2【文献标识码】A 【文章编号】2095-6851(2019)07-057-01
藤黄为藤黄科藤黄属植物藤黄和印支藤黄的干燥胶树脂,又名海藤、玉皇、月黄,始载于《海药本草》[1]木部,其呈圆柱状或不规则块状物,色黄质脆,味酸、辛、涩,有毒。藤黃具有散结、解毒、止血、杀虫的功效。由于藤黄毒性较大,用药安全不易保证,一大程度限制了临床应用[2-5]。本实验比较了藤黄生品醇提物和清水制品醇提物的急性毒性和各炮制品体外培养小鼠脾淋巴细胞的方法,探讨藤黄各炮制品的毒性大小。
1 材料
1.1 药材和动物 藤黄购自安徽亳州药材市场。昆明种小鼠,(20±2)g,雌雄各半,上海斯莱克实验动物有限公司。
1.2 试剂 RPMI1640培养基(HyClone,批号:NZM1294);小牛血清(四季青,批号:150208);乙醇等分析试剂均购自上海国药集团试剂有限公司。
2 方法
2.1 藤黄各炮制品醇提物的制备
2.1.1 藤黄生品 将原药材拣去杂质,轧成粗粒。
2.1.2 藤黄清水制品 分别取生藤黄粗粉,放入烧杯内,加水10倍量。煮沸,滤过,不断搅拌,中途添加沸水,连续煮2h,浓缩至糊状,取出,低温干燥,制备得到2h的清水制藤黄。
2.1.3 95%乙醇提取生藤黄、清水制藤黄:取生藤黄、清水制藤黄各100g,分别加入6、4、2倍量乙醇提取3次,时间分别为20、15、15min,滤过,合并滤液,回收乙醇,55℃下干燥,取出备用。
2.2 小鼠急性毒性正式实验
取小白鼠110只,雌雄各半,按体重随机分为11组,每组10只。组间计量为1:0.65。实验前禁食不禁水16h,按0.2ml·g-1进行灌胃1次,空白组给予等体积的0.8%CMC-Na溶液。给药后连续观察14d。观察小鼠的毛色、精神、动度、进食、饮水等一般情况、中毒症状及死亡情况。
2.3 统计方法 用Bliss法计算半数致死量(LD50),半数抑制浓度(IC50),用SPSS18.0软统计分析。
3 结果分析
3.1 小鼠急性毒性
3.1.1 小鼠死亡情况
根据表1小鼠死亡数,计算出生藤黄醇提物对小鼠的半数致死量为2422.95 mg·kg-1 ,95%可信区间为1935.154~3070.311 mg·kg-1。根据表2小鼠死亡数,计算出清水制藤黄对小鼠的半数致死量为2791.368 mg·kg-1 95%可信区间为2074.983~3543.582mg·kg-1 。
3.1.2 临床表现
在一次性ig给药后2h,小鼠出现不同程度的腹泻,便便黄色、肛门口黄色、活动滞呆、饮食减少、精神状态萎靡、被毛蓬松、眼不睁或半睁。给药4h后,高剂量组出现动物死亡,小鼠脱水、腹泻致死,全身紧缩,僵硬。给药后2d~7d都出现小鼠死亡,7d后活动开始正常,饮食正常、大便正常,不在出现小鼠死亡。
3.1.3 生藤黄和清水制藤黄毒性比较
4 讨论
藤黄经加热反复煮炮制后,其毒性在一定程度上有所下降,加热可能是降低藤黄毒性的主要机理。生藤黄和清水制藤黄体外对小鼠脾淋巴细胞都有致炎作用,生品>清水制品,说明经炮制后藤黄毒性有所降低。综上所述,藤黄经炮制后毒性在一定程度上有所下降,但深入探讨炮制减毒机理提供具体作用靶点的实验有待进一步研究。
参考文献:
[1] 李珣.尚志钧辑校.海药本草[M].芜湖:皖南医学院科研科印,1983:26.
[2] 贺百花,彭求贤,高倩.中药藤黄药理作用研究进展[J].河北北方学院学报,2009,26 (5):71.
[3] 徐文龙,杨柏霖.中药藤黄药理作用的研究进展[J].现代中西医结合杂志,2013,22(11):1239.王园园,汪盈盈.中药藤黄研究进展[J].长江大学学报,2014,23(11):50.
[4] 欧水平,王森,杨启悦等.有毒中药藤黄炮制“减毒增效”作用的研究进展[J].中草药,2011, 42(12):2560.
[5] 丁安伟,束晓云,张丽,唐于平.甘遂饮片的毒效物质基础研究[C].全国第8届天然药物资源学术研讨会论文集,656., http://www.100md.com(赵琴)