新型SMO抑制剂SI-4650对人神经胶质瘤U87MG细胞影响研究
【摘要】目的： 探讨新型精胺氧化酶(spermine oxidase，SMO)小分子抑制剂SI-4650对人神经胶质瘤U87MG细胞的影响。方法：采用MMT法对U87MG细胞的增殖情况进行分析，对U87MG细胞的自噬作用采用激光共聚焦显微镜(LSCM)进行分析。结果： 采用SI-4650对U87MG细胞进行处理2.4、48、72h后，实施MTT法进行分析表明，SI-4650对U87MG细胞增殖具有抑制作用。经处理后，采用LSCM对U87MG细胞进行检测，观察到未经SI-4650处理的U87MG细胞中GEP-LC3分布均匀，而经SI-4650处理的U87MG细胞中GEP-LC3呈点状聚集。结论： SI-4650能够抑制人神经胶质瘤U87MG细胞的增殖，其作用机制可能与诱导细胞自噬有关。
【关键词】SMO抑制剂;神经胶质瘤细胞;细胞增殖;自噬
【中图分类号】R174+.6
【文献标识码】A
, 百拇医药
【文章编号】2095-6851(2019)10-251-01
天然多胺(poly amine，PA)主要包含腐胺(Put)、精脒(Spd)等，为一种在真核细胞中广泛存在且携带正电荷的小分子有机物[1]，可借助静电作用与细胞中的遗传物质等携带负电荷的大分子物质相作用，在细胞的增殖、分化等重要的生理过程中具有重要的作用[2～3]。有研究表明，若细胞内的多胺含量增加，能够促进恶性肿瘤的发生发展，但降低细胞中的多胺含量则能够有效避免肿瘤细胞的增殖，现阶段随着研究的不断加深，多胺代谢途径已逐渐成为肿瘤防治的热点[4]。为明确SI-4650对人神经胶质瘤U87MG细胞的增殖、自噬过程的影响作用，本研究对SI-4650进行研究，现报告如下。
1 材料
1.1 细胞株
人神经胶质瘤U87MG细胞(购于武汉中国培养典藏中心)。
, 百拇医药
1.2 试剂
SI-4650(购于荷兰Specs生物特殊化合物公司);二甲基亚砜、DMEM、BCA定量盒等均购自美国Gibco公司;血清、抗生素等购自于天津灏洋生物。
1.3 仪器
细胞超净台、恒温细胞培养箱、低温冰箱、低温离心机、高效液相色谱分析仪、流式细胞仪等。
2 方法
2.1 SI-4650配置
精确称量SI-4650粉剂并于DMSO中溶解，浓度为100mmol/L的储存液，置于-20℃冰箱中保存;在使用前，使用DMEM培养基将上述液体稀释至适宜浓度。
2.2MTT检测细胞增殖
, 百拇医药
将浓度为5×106/L的处于对数生长期的U87MG细胞接种在96孔细胞培养板中，在细胞培养箱中培养1天后，采用不同浓度的SI-4650培养基培养，每個浓度药物设置4个复孔;继续培养2.4、48、72h后，在每孔中加入MTT试剂200μL，继续在细胞培养箱中培养4h，随后弃去MTT试剂，加入150μL的DMSO，并使用酶标仪于490nm波长处检测吸光度(A)。
2.3 激光共聚焦显微镜观察细胞自噬小体形成
将5×107/L的人神经胶质瘤U87MG细胞悬液接种到专用的细胞培养皿中，继续培养细胞的融合度约为80%时，按照转染试剂标准说明书，对U87MG细胞进行处理2.4h后，采用不同浓度的SI-4650培养基继续培养48h，随后采用LSCM检测细胞内自噬小体。
2.4 统计学方法
采用SPSS 200统计学软件统计分析，计量资料采用t检验，以(x±s)表示;当P<005时，差异有统计学意义。
, 百拇医药
3 结果
31 SI-4650对U87MG细胞增殖的抑制作用
采用SI-4650对U87MG细胞进行处理2.4、48、72h后，实施MTT法进行分析表明，SI-4650对U87MG细胞增殖具有抑制作用。结果见图1。
32 SI-4650诱导U87MG细胞自噬
经处理后，采用LSCM对U87MG细胞进行检测，观察到未经SI-4650处理的U87MG细胞中GEP-LC3分布均匀，而经SI-4650处理的U87MG细胞中GEP-LC3呈点状聚集。则说明SI-4650可诱导U87MG细胞的自噬作用，促进GEP-LC3融合蛋白向自噬小体聚集。
4 讨论
SMO为促进多胺类物质分解的关键作用酶之一，其在细胞内的合成水平能够引起多胺多谢紊乱以及包含肿瘤等多种疾病的发生[5]。因此，随着研究的加深SMO成为肿瘤防治的关键性靶点之一。本研究结果表明，采用SI-4650对U87MG细胞进行处理2.4、48、72h后，实施MTT法进行分析表明，SI-4650对U87MG细胞增殖具有抑制作用。经处理后，采用LSCM对U87MG细胞进行检测，观察到未经SI-4650处理的U87MG细胞中GEP-LC3分布均匀，而经SI-4650处理的U87MG细胞中GEP-LC3呈点状聚集。
, 百拇医药
综上所述，SI-4650能够抑制人神经胶质瘤U87MG细胞的增殖，其作用机制可能与诱导细胞自噬有关。
参考文献：
[1] 刘春霞，黄璐璐，闫辰，等. GLI1抑制剂FL18对胶质母细胞瘤的抑制作用及其机制[J]. 药学学报，2018，53(07)：1.11.3-1.1.2.1
[2] 周游，曹春雨，王艳林. 基于多胺转运系统的靶向抗肿瘤药物研究进展[J]. 生命的化学，2018，38(04)：543-550
[3] 李建明，丁劲松. 基于多胺转运系统的抗肿瘤药物研究进展[J]. 生物技术通报，2017，33(05)：34-39
[4] 易星，莫远亮，姜冬梅，等. 多胺的生物学功能及其调控机制[J]. 动物营养学报，2014，26(02)：348-352
[5] 刘英杰，王玉霞，李骞，等. 一种萘酰亚胺-多胺缀合物对人肝癌HepG2细胞的杀伤作用[J]. 中国药学杂志，2016，51(03)：207-2.1.2, 百拇医药(王蕊)
【关键词】SMO抑制剂;神经胶质瘤细胞;细胞增殖;自噬
【中图分类号】R174+.6
【文献标识码】A
, 百拇医药
【文章编号】2095-6851(2019)10-251-01
天然多胺(poly amine，PA)主要包含腐胺(Put)、精脒(Spd)等，为一种在真核细胞中广泛存在且携带正电荷的小分子有机物[1]，可借助静电作用与细胞中的遗传物质等携带负电荷的大分子物质相作用，在细胞的增殖、分化等重要的生理过程中具有重要的作用[2～3]。有研究表明，若细胞内的多胺含量增加，能够促进恶性肿瘤的发生发展，但降低细胞中的多胺含量则能够有效避免肿瘤细胞的增殖，现阶段随着研究的不断加深，多胺代谢途径已逐渐成为肿瘤防治的热点[4]。为明确SI-4650对人神经胶质瘤U87MG细胞的增殖、自噬过程的影响作用，本研究对SI-4650进行研究，现报告如下。
1 材料
1.1 细胞株
人神经胶质瘤U87MG细胞(购于武汉中国培养典藏中心)。
, 百拇医药
1.2 试剂
SI-4650(购于荷兰Specs生物特殊化合物公司);二甲基亚砜、DMEM、BCA定量盒等均购自美国Gibco公司;血清、抗生素等购自于天津灏洋生物。
1.3 仪器
细胞超净台、恒温细胞培养箱、低温冰箱、低温离心机、高效液相色谱分析仪、流式细胞仪等。
2 方法
2.1 SI-4650配置
精确称量SI-4650粉剂并于DMSO中溶解，浓度为100mmol/L的储存液，置于-20℃冰箱中保存;在使用前，使用DMEM培养基将上述液体稀释至适宜浓度。
2.2MTT检测细胞增殖
, 百拇医药
将浓度为5×106/L的处于对数生长期的U87MG细胞接种在96孔细胞培养板中，在细胞培养箱中培养1天后，采用不同浓度的SI-4650培养基培养，每個浓度药物设置4个复孔;继续培养2.4、48、72h后，在每孔中加入MTT试剂200μL，继续在细胞培养箱中培养4h，随后弃去MTT试剂，加入150μL的DMSO，并使用酶标仪于490nm波长处检测吸光度(A)。
2.3 激光共聚焦显微镜观察细胞自噬小体形成
将5×107/L的人神经胶质瘤U87MG细胞悬液接种到专用的细胞培养皿中，继续培养细胞的融合度约为80%时，按照转染试剂标准说明书，对U87MG细胞进行处理2.4h后，采用不同浓度的SI-4650培养基继续培养48h，随后采用LSCM检测细胞内自噬小体。
2.4 统计学方法
采用SPSS 200统计学软件统计分析，计量资料采用t检验，以(x±s)表示;当P<005时，差异有统计学意义。
, 百拇医药
3 结果
31 SI-4650对U87MG细胞增殖的抑制作用
采用SI-4650对U87MG细胞进行处理2.4、48、72h后，实施MTT法进行分析表明，SI-4650对U87MG细胞增殖具有抑制作用。结果见图1。
32 SI-4650诱导U87MG细胞自噬
经处理后，采用LSCM对U87MG细胞进行检测，观察到未经SI-4650处理的U87MG细胞中GEP-LC3分布均匀，而经SI-4650处理的U87MG细胞中GEP-LC3呈点状聚集。则说明SI-4650可诱导U87MG细胞的自噬作用，促进GEP-LC3融合蛋白向自噬小体聚集。
4 讨论
SMO为促进多胺类物质分解的关键作用酶之一，其在细胞内的合成水平能够引起多胺多谢紊乱以及包含肿瘤等多种疾病的发生[5]。因此，随着研究的加深SMO成为肿瘤防治的关键性靶点之一。本研究结果表明，采用SI-4650对U87MG细胞进行处理2.4、48、72h后，实施MTT法进行分析表明，SI-4650对U87MG细胞增殖具有抑制作用。经处理后，采用LSCM对U87MG细胞进行检测，观察到未经SI-4650处理的U87MG细胞中GEP-LC3分布均匀，而经SI-4650处理的U87MG细胞中GEP-LC3呈点状聚集。
, 百拇医药
综上所述，SI-4650能够抑制人神经胶质瘤U87MG细胞的增殖，其作用机制可能与诱导细胞自噬有关。
参考文献：
[1] 刘春霞，黄璐璐，闫辰，等. GLI1抑制剂FL18对胶质母细胞瘤的抑制作用及其机制[J]. 药学学报，2018，53(07)：1.11.3-1.1.2.1
[2] 周游，曹春雨，王艳林. 基于多胺转运系统的靶向抗肿瘤药物研究进展[J]. 生命的化学，2018，38(04)：543-550
[3] 李建明，丁劲松. 基于多胺转运系统的抗肿瘤药物研究进展[J]. 生物技术通报，2017，33(05)：34-39
[4] 易星，莫远亮，姜冬梅，等. 多胺的生物学功能及其调控机制[J]. 动物营养学报，2014，26(02)：348-352
[5] 刘英杰，王玉霞，李骞，等. 一种萘酰亚胺-多胺缀合物对人肝癌HepG2细胞的杀伤作用[J]. 中国药学杂志，2016，51(03)：207-2.1.2, 百拇医药(王蕊)