动物试验选取了与人类基因近似度为87%的斑马鱼为试验载体，研究表明，在斑马鱼中褪黑素的分泌是受到昼夜生物钟周期和光暗依赖性的多方面影响(图2)。无论是相关基因的表达，还是生物钟周期或光照条件等影响，斑马鱼都和人类具有很高的保守性。斑马鱼松果腺被认为是体内合成褪黑素主要的组织器官。斑马鱼松果腺开始发育于斑马鱼胚胎发育22 hpf(Hour Post Fertilization)，大约在48 hpf，褪黑素合成相关基因开始表达，分泌褪黑素并开始调节斑马鱼昼夜生物钟周期。

    因此，我们收集野生型TU斑马鱼的胚胎，在胚胎发育到48 hpf，将胚胎按照15/孔的密度分别放入6孔细胞培养板中(9.6 cm2/孔)。然后，将装有胚胎的培养板放在不同的光暗条件下进行连续培养3天，到第五天后，将幼鱼收集，提取total RNA进行实时定量PCR检测Aanat2、Hiomt和Tph1a(Tryptophan hydroxylase 1a)，三种基因的表达水平。

    不同光暗条件，分别是24 h光照(标记LL)、24 h暗处理(标记DD)、12 h正常光照12 h暗处理(标记LD)，以及12 h滤光镜片光照12 h暗处理(标记LDS)。其中2～4 d按照全天不同光暗条件进行处理 ...... 濡傛灉鎮ㄥ湪浣跨敤鎵嬫満绛夋祦瑙堟椂鏃犳硶鏌ョ湅鎴栦笅杞藉叏鏂囷紝鍙兘鏄鎼滅储寮曟搸澶辩湡鈥滆浆鐮佲€濓紝璇风偣鍑诲睆骞曟渶涓嬫柟鐨勨€滅數鑴戠増鈥濇垨鈥滃師缃戦〉鈥濊闂€�


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