αv整联蛋白拮抗剂RGD肽在乳腺癌细胞株增殖侵袭中的作用(2)
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参见附件。
细胞周期及凋亡测定
采用流式细胞仪检测RGD肽对人乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞周期及凋亡的影响。首先将MDA-MB-231及MCF-7细胞接种于六孔板，待其生长至对数生长期，弃培养基并用PBS清洗1遍，加入5.0 ml的培养基和100 ?l RGD肽溶液，对照组加入100 ?l PBS溶液，在相同条件下培育24h。PI染色后使用流式细胞仪测定细胞周期及凋亡细胞，重复以上实验3次。
统计学分析
使用SPSS 20.0统计软件对实验数据进行统计分析，计量资料以均数±标准差(±s)表示，组间比较采用独立样本t检验。P<0.05为差异有统计学意义。
结果
RGD肽与细胞结合实验
免疫细胞荧光法检测RGD肽与人乳腺癌细胞株结合实验，结果显示如下：RGD肽与MDA-MB-231和MCF-7细胞均有强特异性的结合作用，表现为明显的强细胞膜荧光染色。对照组RED肽对MDA-MB-231和MCF-7细胞均无明显的特异性结合，视野里仅见微弱背景荧光。
细胞增殖实验
MTT法检测RGD肽对MDA-MB-231和MCF-7细胞增殖能力的影响，其结果如图1所示：培养24h后，RGD肽5 ?mol/L作用于MDA-MB-231和MCF-7细胞，其细胞增殖能力尚无明显改变；当RGD肽浓度增高至25 ?mol/L，人乳腺癌细胞株增殖能力受到明显抑制作用，差异有统计学意义(P<0.05)；随RGD肽浓度的增加，其对MDA-MB-231和MCF-7细胞抑制效果更明显，即RGD肽对人乳腺癌细胞株增殖具有抑制作用，且存在剂量依赖性。而对照组REG肽对MDA-MB-231和MCF-7细胞增殖能力无明显影响(P>0.05)。
图1. RGD肽对MDA-MB-231及MCF-7细胞增殖能力的影响
细胞周期及凋亡检测
应用流式细胞仪对细胞周期及凋亡进行分析，分别使用200 ?mol/L的RGD肽和RED肽对MDA-MB-231和MCF-7细胞处理24h。结果显示MDA-MB-231和MCF-7凋亡率均有明显改变，其中MDA-MB-231细胞凋亡率由对照组的(3.58±1.97)%增加至RGD肽组的(10.43±2.35)%；MCF-7细胞凋亡率由对照组的(2.03±1.78)%增加至RGD肽组的(13 ......
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