谢 婕

    (南京医科大学生殖医学国家重点实验室，江苏 南京 211166)

    不孕不育症是影响人类生殖繁衍的主要疾病。在全球，有近15%的育龄夫妻受到此病的影响。在不孕不育症患者中，女性不孕症患者和男性不育症患者各占50%[1]。不育症主要是由男性体内激素分泌紊乱、染色体突变、DNA受损或罹患代谢疾病等引起其精子的发生过程异常所致[2]。精子的发生过程受到多重严密基因/蛋白网络的调控，mTOR信号通路等相关的信号通路在其中发挥着重要的作用。mTOR信号通路由mTORC1和mTORC2两种复合体组成，Raptor和Rictor分别是这两种复合体中的特异蛋白。mTOR信号通路最早被证实在细胞增殖、细胞骨架形成、糖脂代谢方面发挥着重要的作用。将小鼠体内的Raptor和Rictor基因进行全身性敲除会导致其在胚胎期死亡。因此，mTOR信号通路与小鼠的胚胎发育有关。雷帕霉素(Rapamycin)是mTOR信号通路的重要抑制剂，能够与mTOR蛋白直接结合，抑制其信号通路的功能。在临床上，雷帕霉素曾被广泛用于进行肾脏移植和癌症的治疗中，但男性患者在用药的过程中可发生不育症，其表现为不同程度的少精甚至无精[3]。本研究主要探讨雷帕霉素造成雄性小鼠不育的原因，并分析雷帕霉素引发的雄性小鼠不育症与mTOR信号通路的关系。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物及喂食方案

    本次实验中的29只SPF级B6雄性小鼠由南京医科大学动物中心提供，其中包括3.5 d的小鼠8只，10 d的小鼠4只，14 d的小鼠2只，21 d的小鼠2只，8 w的成年小鼠13只。将其中各日龄的小鼠用于检测不同日龄小鼠睾丸mTOR/Raptor/Rictor基因(蛋白)表达的水平，将其中12只8 w的小鼠用于构建喂食组小鼠模型(分为对照组小鼠6只与喂食组小鼠6只)。将雷帕霉素(14 ppm)添加入小鼠的饲料中。采用2.25 mg/kg的剂量体重比为喂食组小鼠喂食该饲料4周。为对照组小鼠喂食正常的饲料。

    1.2 实验方法

    1.2.1 小鼠睾丸蛋白的提取及检测 取4只3.5 d、2只10 d、1只14 d、1只21 d、1只8 w的成年小鼠、喂食4周后的对照组成年小鼠和喂食组成年小鼠各3只(对照组和喂食组小鼠附睾用于后续精子活力检测实验) ......