吴 菁，吕志武，蒋志勇，李奎生，刘 芳，黄明沂，肖 瑶

    (1.深圳市宝安区福永人民医院消化内科，广东 深圳 518103；2.南方医科大学附属深圳宝安医院消化内科，广东 深圳 518101；3.武汉大学中南医院影像科，湖北 武汉 430071)

    胃癌是一种发病率较高的消化系统恶性肿瘤，严重威胁人类的健康及生命安全[1]。近年来随着我国居民饮食结构的改变及幽门螺杆菌感染率的增加，胃癌的发病率逐年升高，且此病患者的发病年龄趋于年轻化。探究胃癌发生的分子机制，对胃癌的诊断和靶向治疗具有重要意义。miRNA是一类非编码RNA序列，广泛分布于真核细胞内，其长度约为23个核苷酸[2]。miRNA主要在转录后水平调节下游靶基因mRNA的稳定性，影响靶基因的表达[3]。近年来随着分子生物学的发展，研究miRNA在胃癌细胞中的作用为胃癌的分子靶向治疗提供了新的方向[4]。miR-3143是一种新发现的miRNA，参与乳腺癌细胞的代谢过程[5]。miR-3143对胃癌细胞功能的影响尚不明确。本文主要是探讨miR-3143对胃癌HS-746T细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。

    1 材料与方法

    1.1 细胞株与主要试剂

    胃癌HS-746T细胞(购于中国科学院上海生科院细胞资源中心)，胎牛血清和DMEM培养基(购于美国Gibco公司)，miR-NC和miR-3143 mimic(购于广州锐博生物科技有限公司)，Lipofectamine 3000转染试剂(购于美国Invitrogen公司)，qRT-PCR试剂盒(购于日本TaKaRa公司)，细胞周期检测试剂盒和细胞凋亡试剂盒(购于南京凯基生物科技有限公司)，一抗GAPDH、TOP2A、Cyclin H和IAPs(购于美国Affinity公司)，辣根过氧化物酶标记的二抗(购于武汉博士德生物科技公司)。

    1.2 细胞培养和转染

    采用含10%(体积分数)胎牛血清的DMEM培养HS-746T细胞，培养条件：温度为37℃，二氧化碳(carbon dioxide，CO2)浓度为5%。取对数生长期的HS-746T细胞接种于24孔板上 ......