李 兴，吴陈朋，刘 玉，曾宪灵，陈端忠，彭小珍★

    (1. 湖南医药学院公共卫生与检验医学院，湖南 怀化 418000 ；2. 湖南医药学院医学院，湖南 怀化 418000)

    毛秀才又名显脉旋覆花Inula nervosa Wall.，为菊科旋覆花属植物，主要产于我国四川西部、云南北部至南部、贵州西部、广西西部及湖南怀化地区[1-2]。侗药记载，毛秀才具有祛风寒、通经络、消积止痛等功效，尤其在治疗跌打损伤、骨折方面有很好的疗效，且其无毒副作用[3]。但目前关于毛秀才治疗骨折作用机制及分子机制的研究较少。本研究以小鼠颅顶前成骨细胞亚克隆14(MC3T3-E1 subclone 14)为细胞模型，检测毛秀才二氯甲烷部位(INW- Ⅰ)对MC3T3-E1 细胞活性的影响，同时验证毛秀才INW- Ⅰ对该细胞细胞外信号调节激酶(ERK1/2)和骨形态发生蛋白9(BMP-9)mRNA 及蛋白表达的影响，为毛秀才的临床应用提供理论基础。

    1 材料与方法

    1.1 材料和试剂

    毛秀才( 采集于湖南怀化雪峰山)；MC3T3-E1 细胞( 购于中国科学院上海细胞库)；胎牛血清(FBS)(购于美国HyClone 公司)；高糖DMEM 培养基(购于美国Gibco 公司)；CCK-8 试剂盒(购于中国Procell 公司)；ERKI/2、BMP-9 抗体和二抗(购于英国Abcam公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 毛秀才INW- Ⅰ的提取 用95% 的乙醇提取获得毛秀才总浸膏，依次用石油醚、二氯甲烷、正丁醇、乙酸乙酯对毛秀才总浸膏进行萃取，分别获得毛秀才石油醚部位、INW- Ⅰ、正丁醇部位、乙酸乙酯部位和水部位。将毛秀才INW- Ⅰ冻干后获得INW- Ⅰ粉末，置于-20℃的冰箱中保存备用。

    1.2.2 MC3T3-E1 细胞的培养 培养基为10% 的FBS+ 高糖DMEM 培养基，培养环境为37℃、5%的CO2培养箱。

    1.2.3 MC3T3-E1 细胞活性的检测 采用CCK-8试剂盒检测MC3T3-E1 细胞的活性 ......