刘凤林，郭金双，2，柴 谦，杨 阳，孙秋艳

    (1.山东省食品药品审评查验中心，山东 济南 250022；2.中国科学院福建物质结构研究所结构化学国家重点实验室，福建 福州 350002 ；3. 山东省菏泽市单县中心医院，山东 菏泽 274399)

    胸苷激酶1(thymidine kinase 1, TK1)是细胞增殖周期中嘧啶补救合成途径的关键酶之一，是一种新的细胞增殖特异性标志物，可用于评估细胞分裂增殖周期，在肿瘤的早期筛查、肿瘤分期评估、治疗效果监测和预后评价中的作用日益受到关注[1-2]。TK1 水平检测在乳腺癌、肺癌、胃癌等恶性实体瘤监测方面的应用价值较高[3-4]。作为一种优选评估肿瘤细胞增殖速率的标志物，TK1 在健康人血清中的含量极微或检测不到，但其在恶性肿瘤患者体内会随着肿瘤细胞的急剧增殖而升高[5-7]。因此，建立一种高效灵敏、简便快捷的TK1 检测方法具有很重要的现实意义。

    化 学 发 光 免 疫 分 析( Chemiluminescence immunoassay，CLIA) 是将化学发光技术与免疫分析方法相结合的一种新型分析方法，其具有高灵敏度、强特异性、操作简便快捷等优点，在多个检测领域得到了广泛应用[8-9]。目前，尚未有TK1 磁微粒化学发光检测方法的报道。本实验使用TK1 抗体-磁微粒偶联物结合并分离TK1 蛋白，TK1 配对抗体- 吖啶酯发光剂发光，建立了一种TK1 磁微粒化学发光检测方法，为TK1 的高灵敏度、强特异性、准确检测提供一种新的技术手段。

    1 材料与方法

    1.1 材料与仪器

    羧基磁微粒(货号MS04C)购自南京瑞贝西生物科技有限公司；TK1 抗体对(CABT-16288MH&CABT-L869) 购 于 美 国Creative Diagnostics(CD)公司；重组人胸苷激酶1 抗原(8180-TK)购自美国R&D 公司；吖啶酯(货号A690047)购自生工生物工程(上海)有限公司；1- 乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC，货号22980)、N- 羟基磺基琥珀酰亚胺(Sulfo-NHS)购自美国Sigma 公司。化学发光检测仪购自重庆科斯迈生物科技有限公司(型号：SMART500S)。发光底物(含激发液和预激发液，货号：6E23-82 和6C55-82)购自雅培公司。

    1.2 抗TK1 包被抗体-磁微粒偶联物的制备

    羧基磁微粒采用EDC/sulfo-NHS 方法活化 ......