曹正国，田 超，钟苏权，周琳雄，陈桂柳

    (汕头大学医学院附属粤北人民医院泌尿外二科，广东 韶关 512026)

    膀胱尿路上皮癌是泌尿外科发病率最高的恶性上皮肿瘤，目前临床治疗以手术为主，但手术后容易复发和转移，对术后患者的预后、疗效及能否获得较好的生存预期有着重要的影响[1-2]。国内外较多的研究证实，膀胱尿路上皮癌是一种多基因肿瘤疾病，其发生发展是一个复杂、多步骤的过程，包括基因组不稳定性、原癌基因激活和抑癌基因失活、端粒酶的缺失等[3-4]。因此，在高转移潜能的膀胱肿瘤细胞上寻找一些具有能识别复发和进展风险的独特分子标志，可作为较敏感的标志物用于临床预后的评估和靶向治疗。细胞有丝分裂经历 G1期、S 期、G2 期和M 期，通过纺锤体的形成和运动，将复制染色体精确分配到两个子代细胞中，此过程需要纺锤体、多种微管相关蛋白和有丝分裂检查点蛋白的共同参与。有丝分裂纺锤体作为调控细胞有丝分裂活动的核心调控机制，是由驱动蛋白等多种功能蛋白质分子组装和维护的，这些蛋白质分子目前已成为抗肿瘤细胞增殖的有效靶标[5-6]。纺锤体驱动蛋白Eg5 是驱动蛋白家族成员之一，抑制Eg5 能引起细胞周期停滞进而导致细胞凋亡。既往的驱动蛋白抑制剂不仅对有丝分裂细胞的微管有亲和力，对轴突微管同样产生作用，长期使用此类药物会产生不可逆转的神经系统毒性、中性粒细胞减少症等诸多毒副作用，而S-三甲基-L-半胱氨酸(STLC)是2004 年新发现的有效抑制Eg5 的靶向药物[7-8]。目前有关Eg5 在膀胱肿瘤中作用的研究报道较少。为了研究STLC 抑制膀胱肿瘤与Eg5 的关系及靶向药物治疗的机制，我们分别采用流式细胞术、四甲基偶氮唑盐微量酶反应(MTT)比色法、TUNEL 染色法、逆转录- 聚合酶链反应(RT-PCR)和Western Blotting 法检测STLC 对体外培养的人膀胱尿路上皮癌BIU-87 细胞中Eg5 表达的影响。现报道如下。

    1 材料与方法

    1.1 主要材料

    STLC(164739，Sigma 公司)；人膀胱尿路上皮癌BIU-87 细胞(武汉大学典型培养物宝藏中心)；四甲基偶氮唑蓝(MTT)(475989-1GM，Sigma 公司)；TUNEL试剂盒(C1098，碧云天生物有限公司)；Trizol 试剂(15596018，Gibcol 公司)；RT-PCR 试剂盒(KR123，TIANGEN 公司)；兔抗人Eg5 多克隆抗体(SC-365593，Santa Cruz 公司)；Western Blotting system 和ECL 发光试剂盒(RPN2236 ......