黎文涛，伍小琼，王正根

    (1. 南华大学附属第二医院消化内科，湖南 衡阳 421000；2. 岳阳市人民医院，湖南师范大学附属岳阳医院消化内科，湖南 岳阳 414000)

    二十二碳六烯酸(DHA)是一种人体必需脂肪酸，属于w-3 多不饱和脂肪酸[1]。近年来，有研究表明，w-3 多不饱和脂肪酸能够对前列腺癌、结肠癌等多种肿瘤细胞的增殖进行抑制，对肿瘤细胞的凋亡进行诱导，还能够增强药物抑制肿瘤细胞生长的效果[2]。本研究分析了DHA 对人胰腺癌细胞生长的抑制作用。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    购买上海长海医院的人胰腺癌细胞株SW1990、Patu8988，上海西唐生物科技有限公司的兔抗人Bcl-2、COX-2，Beckman Coulter Company 的羊抗兔荧光二抗，Hyclone 公司的RPMI1640 培养基，美国Sigma公司的DHA(纯度为98%)。将DHA 用无水乙醇稀释至100 mg/mL，充氮，避光储存在-80℃的温度下备用。用RPMI1640 培养液稀释DHA 为不同浓度。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养 在RPMI1640 培养基(链霉素100 IU/mL+ 青霉素100 IU/mL+ 丙酮酸钠1 mmol/L+ 谷氨酰胺2 mmol/L+10% 新生牛血清)中常规培养人胰腺癌细胞株SW1990、Patu8988，培养于37℃细胞培养箱(5%CO2)中，待细胞生长到70% ～80% 融合时进行传代培养，在此过程中充分利用0.25% 胰酶消化细胞，在实验中应用指数生长期的细胞。

    1.2.2 胰腺癌细胞增殖检测 运用MTT 法进行检测，将指数生长期的SW1990、Patu8988 细胞收集起来，计数后适当稀释，将细胞悬液制作出来，细胞数为1×105/mL，在96 孔培养板中接种，每孔100 μL，培养24 h，待细胞贴壁后将浓度为0 μg/mL、2.5 μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL、20 μg/mL、50 μg/mL的DHA 培养液更换过来。将0.05% 无水乙醇+ 等量培养液加入浓度为0 μg/mL 的DHA 培养液中。在37℃孵育箱(5%CO2)中分别培养24 h、48 h、72 h，然后将20 μL MTT(5 mg/mL)加入各孔 ......