丹参注射液通过诱导自噬抑制足细胞凋亡的研究
雷帕,氯喹,1材料与方法,1主要试剂与仪器,2细胞培养及干预,3细胞总蛋白提取实验,4Westernblotting检测,5统计学方法,2结果,1氯喹及雷帕霉素联合DSI干预对足细胞自噬的影响,2DSI通过干预自噬影
曾 慧,陈文良,黄文治(广东省中医院,广东 广州 510120)
丹参注射液(Danshen injection, DSI)是一种从中药丹参中提取的制剂,具有活血化瘀、通脉养心的功效,在临床上主要用于治疗心血管疾病,如冠心病、心绞痛等[1]。在中医临床上,瘀证是肾病常见的中医证型,而丹参是活血化瘀的代表药味,因而常被临床上用于治疗伴有瘀证的各种肾脏疾病[2-3]。研究表明,丹参中的多种主要成分可调控自噬,进而发挥调控细胞凋亡的作用,例如丹酚酸B 通过抑制细胞自噬和凋亡阻止糖尿病周围神经病变的发展[4]。然而,DSI 对肾细胞自噬及凋亡的影响尚有待于进一步的研究。本文旨在研究足细胞中自噬与凋亡的关系及DSI 的干预作用,以期为DSI 在肾脏疾病中的应用提供体外的实验数据参考。
1 材料与方法
1.1 主要试剂与仪器
DSI(正大青春宝药业有限公司);脂多糖(Sigma);氯喹(Sigma);雷帕霉素(Sigma);P62抗体(Abcam);Beclin1 抗体(CST);β-actin 抗体(Abcam);Caspase 3 抗体(CST);Bax 抗体(CST);Bcl-2 抗体(CST);兔二抗(Abcam);鼠二抗(Abcam);BCA 测试盒(上海碧云天生物技术有限公司);RIPA裂解液、蛋白酶抑制剂、Loading Buffer(康为世纪生物科技股份有限公司);ECL 超敏发光液、0.45 μm PVDF 膜(Millipore);MPC-5 细胞(上海酶研生物科技有限公司);培养基(Gibco);双抗(Gibco);胎牛血清(Biological Industries);全波长酶标仪(Thermo);光学倒置显微镜(Olympus);全自动化学发光图像分析系统(Tanon) ......
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