罗贤宇

    (中国电子系统工程第二建设有限公司武汉分院， 武汉 430012)

    近年来，随着国外基因治疗产品陆续获批上市，国内基因治疗企业持续投入研究，在国家相关产业政策大力支持下，国内基因治疗市场规模迅速增长，迅速扩大的市场规模衍生出充足的基因治疗产品研发需求，为CDMO企业发展提供广阔空间。基因治疗药物GMP车间的设计和建设也将迎来巨大的市场，目前国内对于此类新型药物的GMP车间设计尚未颁布正式的法规，设计中存在不同的见解，特别是对于涉及生物安全多样的AAV基因治疗药物车间，如何做好良好的工艺设计是行业的一个热议话题。

    1 AAV工艺生产流程

    AAV生产工艺主要有质粒转染293系列细胞和杆状病毒转染昆虫细胞两种，本文主要讨论质粒转染293细胞的工艺路径。生物原液生产工艺流程描述如 下：

    (1)种子复苏；(2)细胞扩增；(3)生物反应器培养；(4)生物反应器转染；(5)深层过滤；(6)超滤浓缩；(7)层析1；(8)层析2；(9)置换缓冲液；(10)除菌过滤。

    2 生物安全分析

    2.1 生物安全定级

    本项目涉及到的生物活性物质主要有293细胞，质粒、AAV病毒，根据《中华人民共和国药典》(2020版三部)、《人间传染的病原微生物名录》、《NIH_Guidelines for Research lnvolving Recombinant DNA Molecules》、ATCC等规定[1-3]，就高不就低的原则，293细胞生物安全等级为BSL-2，质粒生物安全等级为BSL-1、AAV病毒生物安全等级为BSL-2。

    2.2 生物安全防护措施

    生物安全主要防护措施，根据国内外不同的法规要求[4-11]，对比主要的硬件设计要求差异，结合AAV基因治疗药物生产车间的特点(车间涉及大量病毒培养，且存在局部暴露操作)，同时考虑防止产品交叉污染的问题，建议对生产车间设计防护措施如表1所示。

    表1 AAV基因治疗药物生产车间生物安全防护要求Tab.1 Biosafety protection requirements of AAV gene therapy drug production workshop

    3 车间功能区划及人物流组织 ......