姜招嫦，赵娜，黄燕燕，余雪姣，彭颖

    (温州医学院 检验医学与生命科学学院，浙江 温州 325035)

    7型腺病毒温州株基因组主要序列的克隆与分析

    姜招嫦，赵娜，黄燕燕，余雪姣，彭颖

    (温州医学院 检验医学与生命科学学院，浙江 温州 325035)

    目的：克隆和分析7型腺病毒温州株(Ad7wz1)基因组主要序列ITR、E1A261R、E1B55kDa、Hexon和E3。方法：分离并提取了Ad7wz1基因组DNA，PCR扩增得到各基因后利用PMD18 simple T载体进行克隆，并测序分析。结果：获得Ad7wz1 ITR-L、E1A261R、E1B55kDa、Hexon、E3和ITR-R六个基因的克隆，并测得核苷酸序列；分析表明其核苷酸序列和相应的氨基酸序列与GenBank上已发表的Ad7全基因组序列比较同源性分别达到93.2%～100%和97.8%～100%。结论：初步确定本次分离的Ad7wz1毒株为Ad7d2型，Ad7wz1与已经发表的Ad7病毒株序列有高度同源性，为研究Ad7的致病机制提供了重要的理论基础。

    7型腺病毒；克隆，分子；序列分析；序列同源性

    目前已知的腺病毒(adenovirus，Ad)基因序列血清型约52种，分为A～F六组，其中7型腺病毒(adenovirus type seven，Ad7)属于B组[1]。Ad7与人类的呼吸道疾病密切相关，据WHO调查表明，全世界范围内Ad所导致的人类疾病中，约1/5由Ad7引起，尤其儿童感染Ad7会产生重症呼吸道疾病甚至死亡[2]。腺病毒基因组长约36 kb，其两端各有一个反向末端重复区(inverted terminal repeats，ITR)，内侧为病毒包装信号。基因组上含有E1(E1A、E1B)、E2(E2A、E2B)、E3、E4四个早期转录基因。其中E1是表达蛋白参与病毒基因和有关细胞基因的转录，是病毒基因活动的起始因子，E3的基因表达产物与病毒逃避宿主免疫系统有关，为病毒复制的非必需区[3]。Ad7的致病性必定与其特殊的基因结构与功能有关，为此，了解Ad7基因组结构序列，有助于研究Ad7感染致病机制。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1试剂：限制性核酸内切酶、高保真DNA聚合酶、DNA Marker、PMD18 simple T载体均购于宝生物工程(大连)有限公司；PCR引物由上海捷瑞生物工程有限公司合成；其余试剂均为国产分析纯 ......