姚蔚，谢旦立，郭雅君，楼永良

    (温州医学院 检验医学院，浙江 温州 325035)

    创伤弧菌溶细胞素融合蛋白诱导人Jurkat-T淋巴细胞凋亡的研究

    姚蔚，谢旦立，郭雅君，楼永良

    (温州医学院 检验医学院，浙江 温州 325035)

    目的：探讨创伤弧菌溶细胞素融合蛋白(rVvhA)对人Jurkat T淋巴细胞凋亡的作用及凋亡过程中Caspase-3酶活性的变化。方法：利用基因工程方法体外表达、制备和纯化rVvhA；MTT法检测rVvhA对Jurkat T淋巴细胞的细胞毒活性影响；Annexin-V/PI双染流式细胞仪检测rVvhA诱导Jurkat T淋巴细胞凋亡情况；Hochest33258荧光染色激光共聚焦显微镜观察rVvhA诱导Jurkat T细胞核形态的改变；分光光度法检测凋亡过程中Caspase-3酶活性的变化。结果：纯化复性后rVvhA的纯度达到92%以上；MTT结果显示rVvhA活性蛋白能显著抑制Jurkat T淋巴细胞的生长，有效浓度为1.5 HU/mL；流式细胞仪和激光共聚焦检测发现rVvhA作用后Jurkat T淋巴细胞核固缩，产生亮蓝荧光，1.5 HU/mL rVvhA，作用4 h后即可有效诱导其凋亡，凋亡率为(39.13±3.33)%，对照组为(3.43±0.34)%，且能被Caspase全酶抑制剂一定程度抑制。1.5 HU/mL rVvhA作用Jurkat T淋巴细胞3 h，Caspase-3酶活性达到高峰。结论：rVvhA能损伤人Jurkat T淋巴细胞，诱导其发生细胞凋亡，Caspase-3可能在rVvhA诱导的Jurkat T细胞凋亡过程中起重要作用。

    创伤弧菌溶细胞素；人Jurkat T淋巴细胞；细胞凋亡

    创伤弧菌是一种革兰染色阴性的嗜盐性条件致病菌，对人类危害较大，感染后致死率达75%[1]。肝病患者等免疫功能低下的人群是其感染致病的主要高危人群。创伤弧菌感染后，短时间内就会引起伤口炎症，严重时会导致败血症的发生。在该菌诸多的毒力因子中，创伤弧菌溶细胞素作为唯一分泌至胞外具有该菌种属特异性的外毒素，是创伤弧菌感染的重要毒力因子之一。我们前期工作已证实了创伤弧菌溶细胞素融合蛋白rVvhA能诱导人ECV-304细胞凋亡和SMMC7721人肝癌细胞TNF-α、HSP90等炎症因子基因的表达[1]。T淋巴细胞作为机体免疫系统的重要组成部分，对机体免疫系统的平衡、监控及抵御外界感染具有重要作用。综合国内外研究，本实验以人Jurkat T淋巴细胞为模型，通过研究创伤弧菌溶细胞素融合蛋白rVvhA对T细胞损伤的影响 ......