周辉，盛汉松，张弩，林坚，尹波

    (温州医学院附属第二医院 神经外科，浙江 温州 325027)

    帕金森病(Parkinson’s disease，PD)是一种常见的神经系统变性疾病，以中脑黑质多巴胺能神经元变性坏死和纹状体区多巴胺(DA)水平减少为主要病理生理特点[1]。多能成体祖细胞(MAPCs)的许多特性也使其逐渐成为了细胞移植治疗中理想的细胞资源之一。有研究表明，骨髓间质MAPCs在体外培养环境中能够增殖并可以分化为各种谱系的细胞，如神经细胞等[2-4]。本实验将体外纯化、标记处理的骨髓间质MAPCs移植到PD大鼠脑内，观察MAPCs的脑内存活和神经分化情况，对移植大鼠采用免疫组化技术、免疫电镜等方法鉴定和分析MAPCs在大鼠脑组织内神经元样细胞分化的形态学，分析MAPCs神经元样细胞分化和修复神经功能的可能作用机制。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 动物：成年SD大鼠，雌雄各半，体质量80～100 g 4只(用于提取骨髓)和体质量180～200 g 70只(用于建立PD大鼠模型)，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。经行为学测试确认无震颤、嗅探及旋转等异常行为后，将动物置于鼠箱内，给予充足的水和饲料。

    1.1.2 实验试剂：低糖的Dulbecco改良eagle培养基(L-DMEM，GIBCOBRL公司)，胎牛血清(FCS，Hyclone公司)，100 ng/mL LIF，Ficoll-paque液(Ficoll-paque density gradient centrifugation，Sigma公司)；Buffer液(Miltenyi Biotec公司)；碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、成纤维细胞生长因子-8(FGF-8)、Triton X-100 液、鼠单克隆抗体(NSE和MAP-2)、罗达明标记的羊抗鼠抗体(Rhodamine-labeled affinity purified antibody to mouse IgG)、荧光素标记的羊抗鼠抗体(fluorescein-labeled affinity purified antibody to mouse IgG)购自Sigma公司；青霉素、链霉素、胰蛋白酶(GIBCOBRL公司)；氯化氨、碳酸氢钠、肝素、PBS、多聚甲醛、二甲苯、乙醇等。

    1.1.3 主要仪器：细胞培养皿、细胞培养瓶、细胞培养板购于晶美生物工程有限公司；微量加样器(上海高欣玻璃仪器厂)；Olympus倒置显微镜(日本)；Nikon荧光显微摄像系统(日本)；透射电镜(EM-10C型 ......