梅丽琴，曲云鹏，麻健丰，江明华

    (1.温州医学院附属口腔医院 儿童口腔科，浙江 温州 325027；2.中国医科大学辽阳中心医院 口腔科，辽宁 辽阳 111000；3.温州医学院附属口腔医院 口腔修复科，浙江 温州 325027；4.温州医学院附属第二医院 检验科，浙江 温州 325027)

    霍乱毒素(cholera toxin，CT)是由霍乱弧菌分泌产生，引起霍乱腹泻的主要作用物质，由A、B两个亚单位组成，A亚单位是整个毒素的活性中心；B亚单位(CTXB)没有毒性，但它含有大部分毒素抗原的决定簇，有很强的抗原性和免疫原性，可以诱导机体产生较强的免疫反应，能与大多数哺乳动物细胞膜上的神经节苷脂GMI结合，在霍乱的抗毒免疫中起重要作用[1-2]。国内外研究证实CTXB是一种较为理想的免疫分子佐剂[3]。基因防龋疫苗是近年的一个研究热点，但现有的各种核酸防龋疫苗所诱导的免疫应答效能偏低，尚不能达到实用防龋的目的[4-5]。本实验将霍乱毒素B亚单位编码基因(ctxB)克隆到真核表达载体pVAX1，构建重组质粒pVAX1-ctxB，并进一步研究其在真核细胞中的蛋白表达情况，为CTXB在防龋核酸疫苗中应用前景做基础性研究。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 菌种、质粒及细胞株：大肠杆菌JM109购自华美生物工程公司；CHO细胞株购自中国科学院上海细胞研究所；重组质粒p2355(含ctxB)及真核表达载体pVAX1获赠于遵义医学院刘建国教授。

    1.1.2 主要试剂和仪器：限制性内切酶EcoR I和Not I、DNA分子量Marker和T4DNA连接酶均购自大连宝生物公司；lipofectamine 2000购自Invitrogen公司；胶回收试剂盒购自AxyPrep公司；DMEM培养基购自Sigma公司；胎牛血清购自杭州四季青公司；GoldViewTM核酸染料购自赛百盛公司；Plasmid Mini Kit I购自Omega公司；引物合成由上海生工生物技术公司完成 ......