潘晓燕，龚小花，杨丽娟，沈飞霞

    (温州医学院附属第一医院 内分泌科，浙江 温州 325000)

    近年来，2型糖尿病的发病率明显增加，其危害性主要表现在慢性并发症导致的高致死率、高致残率[1]。糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)是其典型的微血管并发症之一。研究表明，由DN造成的肾功能衰竭比非糖尿病患者高17倍，是糖尿病患者主要死亡原因之一，因此DN的防治工作关系重大。

    近年有研究证实炎症递质在DN病理发展中扮演着重要角色。白细胞介素18(IL-18)是IL-1细胞因子家族的成员，主要由活化的单核巨噬细胞产生，其他组织细胞也广泛表达，在免疫调节以及多种免疫相关性疾病的发生、发展、转归中都起着重要作用[2]。最近研究发现，早期DN患者血浆IL-18显著升高，且高水平IL-18能加重DN动物模型肾功能的衰竭，这提示IL-18很可能是启动DN患者肾功能走向衰竭的早期关键环节之一[3-6]。DN肾组织中转化生长因子β1(TGF-β1)高表达是DN肾功能恶化的经典途径之一。然而，DN肾组织中TGF-β1升高的原因仍不完全清楚。研究表明IL-18能通过与IL-18受体的结合激活NF-κB信号转导途径诱导TH1细胞产生IFN-γ、IL-2等细胞因子。在此基础上，本研究以IL-18作为DN抗感染治疗的靶点，选择肾小球系膜细胞(mesangial cells，MCs)作为研究的靶细胞进行研究，观察高糖环境下IL-18和TGF-β1的表达及两者的相互关系，并阻断IL-18观察TGF-β1的表达变化。

    1 材料和方法

    1.1 材料 大鼠肾小球系膜细胞系(HBZY-1，中国典型培养物保藏中心)，葡萄糖(Sigma)，IL-18抗体(Santa cruz)，TGF-β1抗体(Abcam)，二抗(CST)，倒置显微镜(Leica)，荧光定量PCR仪(Roche 480)。

    1.2 方法 肾小球系膜细胞加入ATCC完全生长培养液(含3×105U/L青霉素、100 mg/L链霉素及10%灭活小牛血清)，置于37 ℃、5% CO2浓度、体积分数为0.05的饱和湿度培养箱中，每日换液1次，3～4 d传代1次。

    1.2.1 实验分组：取对数生长期的系膜细胞进行分组实验：①正常糖组(NG组): ATCC培养液中加入葡萄糖(终浓度5.5 mmol/L)；②高糖组(HG组)：在培养液中加入葡萄糖(终浓度25 mmol/L)；③IL-18正常糖组(IL-18/NG组)：在培养液中分别加入四个不同浓度IL-18[1 ng/dL(IL-18/NG-1组)、10 ng/dL(IL-18/NG-2组)、50 ng/dL(IL-18/NG-3组)、100 ng/dL(IL-18/NG-4组)]+葡萄糖浓度5.5 mmol/L；Con/NG-O组培养液中未加入IL-18 ......